Что такое бак лаборатория. Бактериологическая лаборатория: специальная мебель, одежда и посуда. Оборудование микробиологических лабораторий

03.03.2020

ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ №1

ТЕМА: «Виды микробиологических лабораторий. Устройство и оборудование бактериологической лаборатории. Правила работы в лаборатории.

Задачи:

· Изучить виды микробиологических лабораторий

· Изучить устройство и оборудование бактериологической лаборатории

· Изучить правила работы в бактериологической лаборатории

· Изучить виды патологического материала и правила его доставки в лабораторию

· Повторить учебную информацию о микробиологических методах исследования

ЗАДАНИЕ № 1

Изучите виды микробиологических лабораторий.

Бактериологические лаборатории организуются в инфекционных больницах, клиниках, санитарно-эпидемиологических станциях. Задача медицинской бактериологической лаборатории - диагностика инфекционных болезней. В бактериологическую лабораторию медицинский персонал приносит правильно взятый у больного или обследуемого патологический материал /мокроту, мочу, рвотные массы, мазок из зева, кровь, спинномозговую жидкость, желчь, промывные воды бронхов и т.д./, его исследуют и определяют, какой возбудитель находится в патологическом материале, т.е. проводят выделение возбудителя. Кроме этого в серологических лабораториях определяют ответ организма на внедрение микроорганизмов /проводится серологическая диагностика инфекционных заболеваний/. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления микробного загрязнения внешней среды

/ воды, почвы, воздуха/ и различных объектов внешней среды.

По своему назначению различают бактериологические, вирусологические, иммунологические и специально предназначенные для диагностики особо опасных инфекций лаборатории.

Заполните таблицу в тетради

ЗАДАНИЕ № 2

Изучите устройство микробиологической лаборатории.

Микробиологическая лаборатория обязательно размещается в изолированном помещении. В лаборатории должно быть несколько помещений.

Лаборатория оборудуется приточно-вытяжной вентиляцией и противопожарными устройствами.

Помещения лабораторий должны быть удобными для влажной уборки и дезинфекции, в частности, панели окрашиваются светлой масляной краской, полы покрываются линолеумом, а столы – специальной эмалью.

Основным оборудованием лаборатории являются микроскопы, термостаты, холодильники, аппараты для стерилизации (автоклав, сухожаровой шкаф, свертыватель), центрифуга и дистиллированный аппарат.

В вирусологических лабораториях создают боксы с предбоксниками. Кроме обычного оборудования их оснащают ультратермостатом, центрифугой с охлаждением для очистки и концентрации вирусов, холодильником для их хранения при температуре - 20º -70ºС, аппаратом для вакуумного высушивания материалов.

Иммунологические лаборатории оснащают посудой, приборами, реактивами, диагностикумами и аллергенами для серологических реакций.

Персонал микробиологических лабораторий обеспечивают халатами, косынками и шапочками, марлевыми масками, клеенчатыми передниками, нарукавниками, резиновыми перчатками, противочумными костюмами для индивидуальной защиты. В процессе микробиологических исследований необходимо соблюдать строгий санитарно-противоэпидемический режим, исключающий внутрилабораторное заражение. При случайном попадании исследуемого материала или культуры микроорганизмов на руки, стол, халат или обувь следует немедленно провести их дезинфекцию.

После окончания работы питательные среды с посевами ставят в термостат, музейные культуры – в сейфы-холодильники. Столы протирают дезинфицирующим раствором и тщательно моют руки.

После вскрытия инфицированных животных инструменты и шприцы подвергаются стерилизации, отработанные материалы и трупы сжигают или автоклавируют.

Основные помещения лаборатории:

1. Лабораторные комнаты – предназначены для проведения микробиологических исследований. Это светлая комната, окрашенная масляной краской. В ней размещены рабочие столы, холодильник /в нем держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и др./.

2. Термостатная комната. В ней находятся термостаты /аппараты, в которых выращивают микроорганизмы, температура в них должна быть 37 0 С, она ежедневно регистрируется, центрифуги /используются для отделения плотных частиц от жидкости/.

3. Материальная комната в ней находятся шкафы /в них держат штативы, сухие питательные среды, реактивы, приборы/ и др.

Около раковины должен находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.

4. Помещение для приготовления питательных сред – в нем приготавливают питательные среды.

5. Моечная – комната для мытья и обработки посуды.

6. Стерилизационная – в ней находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательные среды, автоклавы, сушильный шкаф.

7. Бокс – строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеззараживание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. В бокс подается обеззараженный воздух. В бокс входят через предбоксник, в котором переодеваются: надевают халат, тапочки, шапочку, маску и переходят в бокс через вторую дверь. В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.

8. Регистратура – в ней регистрируют поступивший патологический материал и результат исследования.

9. Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных.

Общие сведения

Бактериологические лаборатории как самостоятельные структурные единицы организуются при санитарно-эпидемиологических станциях (СЭС), в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных стационарах (например, в туберкулёзных, ревматологических, кожно-венерологических) и в поликлиниках.

Бактериологические лаборатории при СЭС исследуют на общую бактериальную загрязнённость, а также на заражённость условно патогенной и патогенной микрофлорой объекты внешней среды: воздух, воду, почву продукты питания; проводят обследование организованных коллективов и отдельных лиц на носительство патогенных бактерий кишечной группы, коринебактерий дифтерии, коклюша, паракоклюша, менингококка . Работа микробиологической лаборатории в комплексе с другими отделами СЭС имеет определённую задачу - оздоровление окружающей среды и снижение заболеваемости населения.

Бактериологические лаборатории при лечебно-профилактических учреждениях выполняют анализы, необходимые для постановки и уточнения диагноза инфекционного заболевания, способствуя правильному выбору специфического лечения и определению сроков выписки больного из инфекционной больницы. Предметом для исследования в бактериологических лабораториях являются:

выделения из организма человека: моча , кал , мокрота , гной , а также кровь , спинномозговая жидкость и трупный материал;
объекты внешней среды: вода, воздух, почва, продукты питания, смывы с предметов инвентаря, рук и т. п.

Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места

Специфика микробиологических работ требует, чтобы помещение, отведённое под лабораторию, было изолировано от больничных палат, жилых комнат, пищевых блоков. В состав бактериологической лаборатории входят: лабораторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и заражённой посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; средоварочная для приготовления, розлива, стерилизации и хранения питательных сред; виварий для содержания подопытных животных; материальная для хранения запасных реактивов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.

Перечисленные подсобные помещения как самостоятельные структурные единицы входят в состав крупных бактериологических лабораторий. В небольших лабораториях средоварочную и стерилизационную объединяют в одной комнате; специальное помещение для содержания подопытных животных отсутствует.

Под лабораторные комнаты, в которых производят все бактериологические исследование, отводят наиболее светлые, просторные помещения. Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола окрашивают в светлые тона масляной краской. Пол покрывают релином или линолеумом. Такого рода отделка позволяет пользоваться при уборке помещения дезинфицирующими растворами.

В каждой комнате должна быть раковина с водопроводной подводкой и полкой для бутыли с дезинфицирующим раствором.

В одной из комнат оборудуют застеклённый бокс с предбоксником для выполнения работ в асептических условиях. В боксе ставят стол для произведения посевов, табурет , над рабочим местом монтируют бактерицидные лампы. В предбоксник помещают шкаф для хранения стерильного материала. Лабораторное помещение оборудуется столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок, реактивов.

Очень большое значение для работы имеет правильная организация рабочего места врача - бактериолога и лаборанта. Лабораторные столы устанавливают около окон. При размещении их нужно стремиться к тому, чтобы свет падал спереди или сбоку от работающего, лучше с левой стороны, но ни в коем случае не сзади. Желательно, чтобы комнаты для проведения анализов, особенно для микроскопирования, имели ориентацию окон на север или северо-запад, так как для работы необходим равный рассеянный свет. Освещённость поверхности столов для работы должна быть 500 лк. Для удобства дезинфекции поверхность лабораторных столов покрывают пластиком, а каждое рабочее место на нём - зеркальным стеклом.

За каждым сотрудником лаборатории закрепляют отдельное рабочее место площадью 150×60 см. Все рабочие места оборудуют предметами, необходимыми для повседневной работы.

Правила работы и поведения в лаборатории

Особенностью бактериологических работ является постоянное соприкосновение сотрудников лаборатории с заразным материалом, культурами патогенных микробов, заражёнными животными, кровью и выделениями больного. Поэтому все сотрудники бактериологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила работы, которые обеспечивают стерильность в работе и предупреждают возможность возникновения внутрилабораторных заражений:

В помещения бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды - халата и белой шапочки или косынки.
Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи.
Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее платье на халат.
В помещении бактериологической лаборатории категорически запрещается курить, принимать пищу, хранить продукты питания.
Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.
При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность: банки, содержащие материал для исследования, при получении обтирают снаружи дезинфицирующим раствором и ставят не прямо на стол, а на подносы или в кюветы.
Переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, наполненным дезинфицирующим раствором.
О случаях аварии с посудой, содержащей заразный материал, или проливания жидкого заразного материала надо немедленно сообщать заведующему лабораторией или его заместителю. Мероприятия по обеззараживанию загрязнённых патогенным материалом платья частей тела, предметов рабочего места и поверхностей осуществляют немедленно.
При исследовании заразного материала и работе с патогенными культурами микробов необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике технические приёмы, исключающие возможность соприкосновения рук с заразным материалом.
Заражённый материал и ненужные культуры подлежат обязательному уничтожению, по возможности в тот же день. Инструменты, использованные в работе с заразным материалом, тотчас посте их употребления дезинфицируют, как и поверхность рабочего места.
При выполнении бактериологических работ нужно строго следить за чистотой рук: по окончании работы с заразным материалом их дезинфицируют. Рабочее место в конце дня приводят в порядок и тщательно дезинфицируют, а заразный материал и культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят на хранение в запирающийся рефрижератор или сейф.
Работники бактериологической лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, возбудители которых могут встретиться в исследуемых объектах.

Уборка лабораторного помещения

Микробиологическую лабораторию необходимо содержать в чистоте. Следует регулярно проводить гигиеническую уборку помещений лаборатории. Обеспечить полную стерильность лаборатории очень трудно и это не всегда необходимо, но значительно снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях в лабораторных помещениях возможно. Это достигается путём применения на практике методов дезинфекции, то есть уничтожения возбудителей инфекционных болезней на объектах внешней среды.

Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории обрабатывают пылесосом и протирают различными дезинфицирующими растворами. Обработка пылесосом обеспечивает освобождение предметов от пыли и удаление с них значительного количества микроорганизмов. Установлено, что при 4-кратном проведении щёткой пылесоса по поверхности предмета с него удаляется примерно 47 % микроорганизмов, а при 12-кратном - до 97 %. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего применяют 2-3%-ным раствором соды (бикарбонат натрия) или лизола (препарат фенола с добавлением зелёного мыла), 0,5-3%-ным водным раствором хлорамина и некоторыми другими дезинфектантами.

Воздух в лаборатории наиболее просто дезинфицировать проветриванием. Продолжительная вентиляция помещения через форточку (не менее 30-60 минут) приводит к резкому снижению количества микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице в температуре между наружным воздухом и воздухом помещения. Более эффективный и наиболее часто применяемый способ дезинфекции воздуха - облучение УФ-лучами с длиной волны от 200 до 400 нм. Эти лучи обладают высокой антимикробной активностью и могут вызывать гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов.

Литература

Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Бактериологическая лаборатория" в других словарях:

1) учебное, научное, практическое, производственное учреждение или подразделение такого учреждения, предприятия, выполняющее экспериментальные, контрольные или аналитические исследования; 2) помещение, в к ром проводят указанные исследования. В… … Словарь микробиологии

Л. в составе санитарно эпидемиологической станции или клинико диагностической Л., предназначенная для проведения микробиологических (бактериологических, иммунологических и др.) исследований с целью идентификации возбудителей, уточнения диагноза и … Большой медицинский словарь

Эта статья или раздел нуждается в переработке. Пожалуйста, улучшите статью в соответствии с правилами написания статей. Научно исследовательская лаборатория лаборатория для проведения экспериментов и научных исследований учёных и… … Википедия Медицинская энциклопедия

Проф. Леффлер (Loeffler) описал в 1892 г. наблюдавшуюся им в Грейфсвальде эпизоотию среди белых мышей, предназначенных для различных опытов. Возбудителем этой эпизоотии при исследовании оказался специфический микроорганизм, который Леффлер и… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона

Учреждения системы здравоохранения либо структурные подразделения лечебно профилактических или санитарно профилактических учреждений, предназначенные для проведения различных медицинских исследований. В эту группу не входят научно… … Медицинская энциклопедия

проводящей работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности

Таблица 1

1	2	3
1.		не менее 12
2.	Посевная
3.	Помещение для исследований на кишечную группу инфекций	6 на 1 рабочее место, но не менее 12
4.	Помещение для фаготипирования	не менее 12
5.	Помещения для проведения исследований по санитарной бактериологии:
1)	для врачей	6 на 1 рабочее место, но не менее 12
2)	для лаборантов	6 на 1 рабочее место, но не менее 12
3)	бокс с предбоксом	не менее 12
6.	Помещение для исследования на капельные инфекции:
1)	для врачей	6 на 1 рабочее место, но не менее 12
2)	для лаборантов	6 на 1 рабочее место, но не менее 12
3)	бокс с предбоксом	не менее 12
4)	помещение для серологических исследований	не менее 14
5)	бокс с предбоксом для исследования на стерильность	не менее 12
6)	моечная	не менее 18
7)	препараторская	6 на 1 рабочее место, но не менее 10
8)	стерилизационная	не менее 15 на 2 стерилизационных шкафа, на каждый дополнительный шкаф не менее 5
7.	Термальные комнаты:
1)	для исследования на кишечные инфекции	не менее 6
2)	для исследования по санитарной бактериологии	не менее 6
3)	с температурным режимом плюс 43 0 С	не менее 6
8.	Холодильная камера	не менее 6
9.	Автоклавная для обеззараживания отработанного инфекционного материала и стерилизации сред, посуды	не менее 10 на 1 автоклав, На каждый дополнительный не менее 5
10.	Помещения для приготовления питательных сред:
1)	средоварочная	не менее 12
2)	бокс с предбоксом для розлива сред	не менее 10
11.	Кладовые:
1)	стерильной лабораторной посуды	не менее 12
2)	не стерильной лабораторной посуды	не менее 12
12.	Санитарный пропускник персонала:
1)	гардероб для верхней одежды	0,4 на шкаф, но не менее 6
2)	душевая на 1 сетку	не менее 1
3)		0,4 на шкаф, но не менее 6
4)	туалет на 1 унитаз	не менее 0,85
13.	Комната персонала	не менее 8
14.	Регистратура и выдача результатов анализов	не менее 6
1)	помещение для забора проб	не менее 6
15.	Туалет на 1 унитаз	не менее 0,85
16.	Учебная комната	4 на 1 место, но не менее 30

Примечание: в лабораториях с небольшим объемом работы набор помещений зависит от выполняемой номенклатуры исследований. Допускается размещать в одном помещении: препараторскую и стерилизационную (18 м 2), боксы по санитарной бактериологии и боксы капельных инфекций (6 м 2).

^ Набор помещений и площадей бактериологической лаборатории, проводящей работу с микроорганизмами I-II групп патогенности

Таблица 2

В чистой зоне предусматриваются:

гардероб для верхней одежды

0,4 на шкаф, но не менее 6

гардероб для специальной одежды

0,4 на шкаф, но не менее 6

кабинет заведующего лабораторией

не менее 12

комнаты для административной работы

не менее 12

В условно-чистой зоне предусматриваются:

комната с боксом для приготовления и розлива питательных сред

не менее 12

автоклавная на 1 автоклав

не менее 10, на каждый

Дополнительный – не менее 5

препараторская-стерилизационная

не менее 18

моечная

не менее 18

кладовая

не менее 12

туалет на 1 унитаз

не менее 0,85

В заразной зоне предусматриваются:

5-6 боксов с предбоксниками

не менее 9

Не менее 3

помещение для экспресс-диагностики

не менее 12

автоклавная на 1 автоклав

не менее 10, на каждый

Примечание: помещения условно-чистой зоны отделены от помещений чистой зоны санитарным пропускником.

^ Набор помещений и площадей вирусологической лаборатории

Таблица 3

1	2	3
1.	Кабинет заведующего лабораторией	не менее 12
2.	Помещения для идентификации респираторных вирусов:
1)	бокс с предбоксом для заражения культуры тканей и эмбрионов	не менее 12
2)	люминесцентная	не менее 10
3.	Помещения для идентификации энтеровирусов:
1)	бокс с предбоксом для заражения культуры тканей	не менее 12
2)	бокс с предбоксом для работы с эталонными штаммами	не менее 12
3)	бокс с предбоксом для санитарной вирусологии	не менее 12
4.	Помещение для приготовления культуры тканей:
1)	бокс с предбоксом	не менее 12
5.	Помещение для иммуноферментного анализа:
1)	бокс с предбоксом	не менее 12
6.	Помещения для проведения полимеразной цепной реакции:
1)	зона подготовки проб	не менее 12
2)	зона приготовления реакционной смеси	не менее 10
3)	зона амплификации и детекции	не менее 10
7.	Автоклавная на 2 автоклава	не менее 15
8.	Моечная	не менее 12
9.	Препараторская-стерилизационная	не менее 6
10.	Кладовая для посуды, реактивов, материалов	не менее 6
11.	Комната для регистрации, приема, сортировки и выдачи результатов анализов	не менее 8
12.	Комната для персонала	не менее 8
13.	Санитарный пропускник для персонала:
1)	гардероб для верхней одежды	0,4 на шкаф, но не менее 6
2)	душевая на 1 сетку	не менее 1
3)	гардероб для специальной одежды	0,4 на шкаф, но не менее 6
14.	Туалет на 1 унитаз	не менее 0,85

Примечание: работы по заражению культуры тканей, выполнению исследований по санитарной вирусологии и работа с эталонными штаммами допускается проводить в одном боксе с предбоксом при установке отдельных боксов биологической безопасности.

Таблица 4

№ п/п	Наименование помещений	Площадь, м 2
1	2	3
1.	Комната для приема, регистрации и выдачи результатов анализов	6 на 1 рабочее место, но не менее 12
2.	Помещение для гельминтологических исследований	9 на 1 рабочее место, но не менее 12
3.	Помещение серологических исследований	не менее 12
4.	Помещение для экспресс-диагностики	не менее 12
5.	Моечная	не менее 9
6.	Гардероб для специальной одежды	0,4 на шкаф, но не менее 6
7.	Комната персонала	не менее 12
8.	Комната энтомологических исследований	не менее 12
9.	Кладовая	не менее 6
10.	Гардероб для верхней одежды	0,4 на шкаф, но не менее 6
11.	Туалет на 1 унитаз	не менее 0,85

^ Набор помещений и площадей санитарно-химической лаборатории

и лаборатории по определению остаточных количеств

пестицидов и нитратов

Таблица 5

№ п/п	Наименование помещений	Площадь, м 2
1	2	3
1.	Аналитический зал гигиены труда	не менее 18
2.	Аналитический зал гигиены питания	не менее 18
3.	Аналитический зал коммунальной гигиены	не менее 18
4.	Аналитический зал для определения пестицидов и нитратов	не менее 18
5.	Хроматографическая	не менее 6 на один хроматограф
6.	Атомно-абсорбционная	не менее 10
7.	Помещение для подготовки и озоления проб	не менее 15
8.	Весовая	не менее 4 на 1 весы, но не менее 6
9.	Моечная-дистилляторная	не менее 10
10.	Кабинет заведующего лабораторией	не менее 12
11.		не менее 4 на одного человека
12.	Помещения для хранения реактивов	не менее 10
13.	Комната регистрации, приема образцов и выдачи результатов	не менее 6
14.	Туалет на 1 унитаз	не менее 0,85

^ Набор помещений и площадей лаборатории токсикологии

полимеров и других химических веществ

Таблица 6

1	2	3
1.	Кабинет заведующего	не менее 12
2.	Рабочие кабинеты для специалистов	не менее 4 на одного человека
3.	Затравочная - ингаляционная	не менее 12
4.	Помещение для патоморфологических и биохимических исследований	не менее 18
5.	Помещение для функциональных (токсикологических) исследований	не менее 18
6.	Помещение для санитарно-химических исследований	не менее 18
7.	Материальная (комната для подготовки проб)	не менее 6
8.	Моечная	не менее 12
9.	Весовая	не менее 4 на 1 весы, но не менее 6

^ Набор помещений и площадей лаборатории электромагнитных

полей и других физических факторов

Таблица 7

№ п/п	Наименование помещений	Площадь, м 2
1	2	3
1.	Кабинет заведующего	не менее 12
2.	Рабочие кабинеты для специалистов	не менее 4 на одного человека
3.	Помещение для хранения шумовибрационной аппаратуры	не менее 10
4.	Помещение для хранения, подготовки, ремонта и настройки аппаратуры для измерения электромагнитных полей	не менее 10
5.	Душевая на 1 сетку	не менее 1
6.	Туалет на 1 унитаз	не менее 0,85
7.	Гардероб для верхней одежды	не менее 4

^ Набор помещений и площадей радиологической лаборатории

Таблица8

1	2	3
1.	Кабинет заведующего	не менее 12
2.	Рабочие кабинеты для специалистов	не менее 4 на одного человека
3.	Помещение для приемки и первичной обработки проб	не менее 16
4.	Помещение для хранения и озоления проб	не менее 18
5.	Радиохимическая (чистая зона)
6.	Радиохимическая (грязная зона)	не менее 20, но не менее 10 на одно рабочее место
7.	Радиометрическая	не менее 20
8.	Спектрометрическая	не менее 18
9.	Помещение для хранения переносной аппаратуры	не менее 8
10.	Помещение для дезактивации посуды, контейнеров, оборудования, белья и специальной одежды	не менее 20
11.	Гардероб для верхней одежды	не менее 4
12.	Душевая на 1 сетку	не менее 1
13.	Туалет на 1 унитаз	не менее 0,85

_____________________________

Приложение 2

К лабораториям»

Требования к применению защитного костюма

1. В зависимости от характера выполняемой работы пользуются следующими типами защитных костюмов:

1) 1 типа – пижама или комбинезон, медицинские тапочки, медицинская шапочка, большая косынка (капюшон), противочумный халат, респиратор-капюшон положительного давления, ватно-марлевая маска (противопылевой респиратор, фильтрующий или кислородно-изолирующий противогаз), очки, резиновые перчатки, полотенце, носки, тапочки, сапоги резиновые;

2) 2 типа – пижама или комбинезон, медицинские тапочки, медицинская шапочка, большая косынка (капюшон), противочумный халат, ватно-марлевая маска, резиновые перчатки, полотенце, носки, тапочки, сапоги резиновые;

3) 3 типа – пижама, медицинская шапочка, большая косынка, противочумный халат, резиновые перчатки, полотенце, носки, тапочки, галоши;

4) 4 типа – пижама, шапочка (малая косынка), противочумный халат (хирургический), носки, тапочки.

2. Комбинезоны и пижамы должны быть из плотной ткани (бязи или полотна), спереди с глухой застежкой на пуговицы.

3. Противочумный халат шьют по типу хирургического, но значительно длиннее (до нижней трети голени), при этом полы его должны глубоко заходить одна на другую; пояс и завязки у ворота должны состоять из двух частей, пришитых каждая к отдельной поле, для завязывания рукавов пришивают одну длинную тесемку.

4. Противочумную косынку изготовляют размером 90х90х125 см.

5. Ватно-марлевую маску изготавливают из куска марли длиной 125 см и шириной 50 см. Кусок марли разрезают по длине 50 см с двух сторон посередине с наружных концов, затем в средней части куска марли в продольном направлении укладывают сплошной ровный пласт ваты длиной 25 см, шириной 17 см. Края куска марли заворачивают внахлест.

6. Очки применяют "летные" с широким, плотно прилегающим краем, изогнутыми стеклами или любой иной конструкции, обеспечивающий их герметичность.

7. Противочумный костюм надевают до входа в помещение, где работают с заразным материалом в следующей последовательности: пижама (комбинезон), носки, тапочки, медицинская шапочка, капюшон (большая косынка), противочумный халат и сапоги. Тесемки у ворота халата и пояс халата завязывают спереди на левой стороне обязательно петлей, после чего закрепляют тесемки на рукавах. Респиратор (маска) должен закрывать рот и нос, верхние тесемки маски завязывают петлей на затылке, нижние на темени, по бокам крыльев носа закладывают ватные тампоны. Очки должны быть хорошо пригнаны и проверены на отсутствие фильтрации воздуха.

8. Для обеззараживания костюма предусматриваются отдельные емкости с дезинфицирующим раствором для обработки: сапог или галош, рук в перчатках в процессе снятия костюма, ватно-марлевых масок, халата, косынки (капюшона), полотенца, перчаток. Очки погружаются в 70° спирт.

9. При обеззараживании автоклавированием, кипячением или в дезинфицирующей камере, костюм складывают соответственно в биксы, двойные мешки.

10. Костюм снимают в следующем порядке, погружая руки в перчатках в дезинфицирующий раствор после снятия каждой части костюма:

1) сапоги или галоши протирают сверху вниз тампонами, обильно смоченными дезинфицирующим раствором, вынимают полотенце;

2) протирают ватным тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором, фартук, при наличии его в костюме, снимают, складывая наружной стороной внутрь;

3) снимают нарукавники и вторую пару перчаток, если они были необходимы при работе;

4) снимают очки, оттягивая их двумя руками вперед, вверх и назад за голову;

5) ватно-марлевую маску развязывают и снимают, не касаясь лица наружной ее стороной;

6) развязывают завязки ворота халата, пояс и опустив верхний край перчаток, развязывают завязки рукавов, снимают халат, заворачивая наружную часть его внутрь;

7) снимают косынку, осторожно собирая все концы ее в одну руку на затылке;

8) снимают перчатки (при подозрении на нарушение целостности перчаток их проверяют в дезинфицирующем растворе, (но не воздухом);

9) снимают сапоги;

10) после снятия защитного костюма руки обрабатывают 70° спиртом, затем тщательно моют с мылом.

_________________________

Приложение 3

К Санитарным правилам «Санитарно-

Эпидемиологические требования

К лабораториям»

Министерство здравоохранения Республики Казахстан

РАЗРЕШЕНИЕ

Выдано лаборатории________________________________________________________

(наименование организации)

На проведение ________________________________________________________

(виды работ: диагностическая, экспериментальная, производственная)

С микроорганизмами________________________группы патогенности, включая

(наименование микроорганизмов)

__________________________________________________________________

На основании: ____________________________________________________

__________________________________________________________________

«____»______________20____года

Действительно в течение ___________________________________лет (год) с момента выдачи

Председатель

Режимной комиссии

_________________________

Приложение 4

К Санитарным правилам «Санитарно-

Эпидемиологические требования

К лабораториям»

^ Классификация микроорганизмов

I-IV групп патогенности

ТЕМА ЗАНЯТИЯ : Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ : Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней. Ознакомиться с принципами классификации микроорганизмов. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов. Освоить бактериоскопический метод исследования и технику микроскопирования с иммерсионной системой.

ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ :

1. Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней.

2. Познакомиться с принципами классификации микроорганизмов.

3. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов.

4. Освоить технику микроскопирования с иммерсионной системой.

Устройство бактериологической лаборатории

Бактериологическая лаборатория предназначена для исследования материалов, содержащих возбудителей бактериальных инфекций, для определения санитарно-микробиологических показателей, контроля состояния и напряженности специфического иммунитета и других микробиологических исследований. Бактериологическая лаборатория должна размещаться в изолированных от других лабораторий помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Лаборатория должна иметь отдельный вход, гардероб и душевую. В состав бактериологической лаборатории должны входить следующие помещения:

Комната приема и регистрации материалов;

Боксированные помещения для микробиологических исследований;

Автоклавная;

Моечная;

Виварий.

Комнаты для микробиологических исследований оборудуют термостатами, холодильниками, центрифугами, весами, водяными банями, электромагнитными мешалками. На столах размещают необходимую аппаратуру. Работу с инфицированным материалом проводят в боксе с предбоксником . У входа в бокс должен быть коврик, пропитанный дезраствором. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на питательные среды. Поэтому в боксе располагают столы, на которых размещают необходимые для работы инструменты: емкости с дезрастворами для использованной посуды, штативы для пробирок, пробирки и чашки Петри с питательными средами, стерильные пипетки, ступки и т. д. В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть сменная обувь. В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники, центрифуги и другое оборудование. В боксах и предбоксниках ежедневно проводят влажную уборку, дезинфекционную обработку и облучение с помощью бактерицидных ламп в течение 30-40 минут перед началом работы и после работы.

В автоклавной необходимо иметь два автоклава: один автоклав для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов); другой автоклав для инфицированных материалов (для обезвреживания инфицированных инструментов и материалов).

Моечная предназначена для мытья посуды. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации. В ней размещают сушильные шкафы.

Виварием называется помещение, используемое для содержания лабораторных животных. В виварии необходимо иметь карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, помещения для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухню для приготовления корма, кладовую, фуражную, трупосжигательную печь. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга.

Введение

Подобно общей части любой другой науки, общая бактериология рассматривает не конкретные вопросы (скажем, идентификацию отдельных видов бактерий), а проблемы в целом; ее методология охватывает основные процедуры, которые находят широкое применение в самых разнообразных лабораторных исследованиях. Данное учебно-методическое пособие не нацелено на идентификацию какой-либо группы микроорганизмов. Это задача следующих изданий – по частной и санитарной микробиологии. Однако методы, приведенные в нем, могут быть полезными в любой области, где приходится иметь дело с бактериями, и могут применяться для решения практических задач, включающих выделение и типизацию бактерий.

Бактериология стала наукой только после того, как были разработаны уникальные методы, благодаря которым она продолжает оказывать влияние и проникать в такие появившиеся позднее области науки, как вирусология, иммунология и молекулярная биология. Разработанная Р. Кохом техника использования чистых культур и впервые примененные Л. Пастером иммунологические реакции и химический анализ и сейчас не утратили своего значения.

Методология общей бактериологии отражена в данном издании с помощью такого построения, которое типично для стандартных учебных пособий по этой дисциплине. Однако, в отличие от лабораторных практикумов по курсу микробиологии для вузов, она по некоторым разделам изложена более детально и носит справочный характер. Данная структура учитывает особенность подготовки и специализации врачей-бактериологов и ветсанэкспертов. Часто материал излагается произвольно, поэтому некоторые методы упоминаются несколько раз, что обусловлено стремлением продемонстрировать их взаимосвязь.

Бактериологическая лаборатория

Бактериологические лаборатории как структурные единицы организуются в составе областных, районных, межрайонных ветеринарных лабораториях, а также в структуре зональных ветеринарных лабораторий. Они также организованы при центрах санитарно-эпидемиологического надзора, в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных стационарах (например, в туберкулезных, ревматологических, кожно-венерологических), и в поликлиниках. Бактериологические лаборатории входят в состав специализированных научно-исследовательских учреждений. Бактериологические лаборатории постоянно используются для подтверждения или установления оценки пригодности мяса на пищевые цели по ВСЭ.

Объектами исследования в бактериологических лабораториях являются:

1. Выделения из организма: моча, кал, мокрота, гной, а также кровь, патологический и трупный материал.

2. Объекты внешней среды: вода, воздух, почва, смывы с предметов инвентаря, корма, технологическое сырьё получаемое от убоя сельскохозяйственных животных.

3. Продукты питания, образцы мяса и мясопродуктов, молока и молокопродуктов, которым необходимо дать оценку на пригодность для пищевых целей.

Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места

Специфика микробиологических работ требует, чтобы помещение, отведенное под лабораторию, было изолировано от жилых комнат, пищевых блоков и других непрофильных производственных помещений.

В состав бактериологической лаборатории входят: лабораторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и зараженной посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; бактериологическая кухня – для приготовления, разлива, стерилизации и хранения питательных сред; виварий для содержания подопытных животных; материальная для хранения запасных реактивов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.

Перечисленные подсобные помещения как самостоятельные структурные единицы входят в состав крупных бактериологических лабораторий. В небольших лабораториях бактериологическую кухню и стерилизационную объединяют в одной комнате; специальное помещение для содержания подопытных животных отсутствует.

Помещения микробиологических лабораторий по степени опасности для персонала разделяются на 2 зоны:

I. "Заразная" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где осуществляются манипуляции с патогенными биологическими агентами и их хранение, персонал одет в соответствующий тип защитной одежды.

II. "Чистая" зона - помещения, где не проводят работу с биологическим материалом, персонал одет в личную одежду.

Под лабораторные комнаты, в которых производят все бактериологические исследования, отводят наиболее светлые, просторные помещения. Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола окрашивают в светлые тона масляной краской или покрывают кафелем. Пол застилают релином или линолеумом. Такого рода отделка позволяет пользоваться при уборке помещения дезинфицирующими растворами.

В одной из комнат оборудуют застекленный бокс - изолированное помещение с тамбуром (предбоксником) для выполнения работ в асептических условиях. В боксе ставят стол для посевов, табурет, над рабочим местом монтируют бактерицидные лампы. В предбокснике помещают шкаф для хранения стерильного материала. Окна и двери помещений "заразной" зоны должны быть герметичными. Имеющаяся вытяжная вентиляция из "заразной" зоны должна быть изолирована от других вентиляционных систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха.

Лабораторное помещение оборудуется столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок и реактивов.

Очень большое значение для работы имеет правильная организация рабочего места врача-бактериолога и лаборанта. Лабораторные столы устанавливают около окон. При размещении их нужно стремиться к тому, чтобы свет падал спереди или сбоку от работающего, лучше с левой стороны, но ни в коем случае не сзади. Желательно, чтобы комнаты для проведения анализов, особенно для микроскопирования, имели ориентацию окон на север или северо-запад, так как для работы необходим ровный рассеянный свет. Освещенность поверхности столов для работы должна быть 500 лк. Для удобства дезинфекции поверхность лабораторных столов покрывают пластиком или обивают железом. За каждым сотрудником лаборатории закрепляют отдельное рабочее место размером 150´60 см.

Все рабочие места оборудуют предметами, необходимыми для повседневной бактериологической работы, перечень которых дан в таблице 1.

Таблица 1.

Необходимые предметы для бактериологической работы

Наименование предмета	Примерное количество
1. Набор красок и реактивов для окраски
2. Стекла предметные	25-50
3. Стекла покровные	25-50
4. Стекла с лунками	5-10
5. Штатив под пробирки
6. Петля бактериальная
7. Шпатели стеклянные
8. Шпатели металлические
9. Банка с ватой
10. Пипетки, градуированные на 1, 2, 5, 10 мл	По 25 каждого объема
11. Пипетки пастеровские	25-50
12. Пинцет, ножницы, скальпель	По 1
13. Емкости с дезинфицирующими растворами
14. Микроскоп с осветителем
15. Лупа 5 ´
16. Масленка с иммерсионным маслом
17. Фильтровальная бумага	3-5 листов
18. Банка с дезинфицирующим раствором для пипеток
19. Спиртовая или газовая горелка
20. Установка для окраски препаратов
21. Песочные часы на 1 или 2 минуты	По 1
22. Груша с резиновой трубкой
23. Карандаш по стеклу
24. Банка со спиртовыми ватками
25. Необходимая стерильная посуда	-

Дезинфекция

Дезинфекцией является уничтожение микроорганизмов в объектах внешней среды.

В микробиологических лабораториях дезинфекционные мероприятия используются очень широко. Оканчивая работу с заразным материалом, сотрудники бактериологических лабораторий производят профилактическую дезинфекцию рук и рабочего места.

Дезинфекции подвергают отработанный патологический материал (кал, моча, мокрота, различного вида жидкость, кровь) перед выбрасыванием его в канализацию.

Загрязненные патологическим материалом или культурой микробов градуированные и пастеровские пипетки, стеклянные шпатели и металлические инструменты тотчас после их употребления опускают в стеклянные банки с дезинфицирующим раствором, находящиеся на столе у каждого рабочего места.

Обязательной дезинфекции подлежат также использованные в работе предметные и покровные стекла, так как даже в фиксированном и окрашенном мазке иногда сохраняются жизнеспособные микроорганизмы, которые могут явиться источником внутрилабораторного заражения. Не обрабатывается дезинфицирующими средствами только та посуда, в которой выращивались микроорганизмы. Ее складывают в металлические бачки или биксы, пломбируют и сдают на автоклавирование.

Выбор дезинфицирующего вещества, концентрация его раствора, соотношение между количеством дезинфицирующего вещества и обеззараживаемого материала, а также продолжительность срока дезинфекции устанавливаются в зависимости от конкретных условий, учитывающих в первую очередь устойчивость обеззараживаемых микробов, степень предполагаемого загрязнения, состав и консистенцию материала, в котором они находятся.

Дезинфекция рук после работы с заразным материалом и при попадании его на кожу. По окончании работы с заразным материалом руки профилактически дезинфицируют. Ватный шарик или марлевую салфетку смачивают 1% раствором хлорамина, протирают сначала левую, затем правую кисть руки в такой последовательности: тыл кисти, ладонная поверхность, межпальцевые пространства, ногтевые ложа. Таким образом, сначала обрабатывают места наименее загрязненные, затем переходят к участкам кожи, загрязненным наиболее сильно. Протирают руки в течение 2 минут двумя тампонами последовательно. При загрязнении рук культурой патогенного микроба или патологическим материалом в первую очередь дезинфицируют загрязненные участки кожи. С этой целью их покрывают на 3-5 минут ватой, увлажненной 1% раствором хлорамина, затем вату сбрасывают в бачок или ведро с отработанным материалом, а руки обрабатывают вторым тампоном так же, как и при профилактической дезинфекции. После обработки хлорамином руки моют теплой водой с мылом. При работе с бактериями, образующими споры, обработка рук производится 1% активированным хлорамином. При попадании на руки заразного материала экспозицию дезинфицирующего вещества увеличивают до 5 минут.

Стерилизация

Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования

Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки.

Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-10 штук. Пастеровские пипетки по 3-15 шт. заворачивают в оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

В верхнюю часть градуированных пипеток, как и в пастеровские пипетки, вставляют предохранительную вату и затем заворачивают в плотную бумагу, нарезанную предварительно полосками шириной 2-2,5 см и длиной 50-70 см. Полоску кладут на стол, левый конец ее загибают и завертывают им кончик пипетки, затем, вращая пипетку, навертывают на нее ленту бумаги. Для того чтобы бумага не разворачивалась, противоположный конец ее закручивают или приклеивают. На бумаге надписывают объем завернутой пипетки. При наличии пеналов градуированные пипетки стерилизуют в них.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 180°С и 160°С соответственно 1 ч и 150 минут.

б) в автоклаве при давлении 1,5 атм. в течение 60 минут, для уничтожения споровой микрофлоры – 90 минут при 2 атм.

Стерилизация шприцев. Шприцы стерилизуют в разобранном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микрофлорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) - 30 мин. Простерилизованный шприц собирают после того, как он остынет, в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, предварительно вынув из нее мандрен. Иглу, цилиндр и поршень берут пинцетом, который стерилизуют вместе со шприцем.

Стерилизация металлических инструментов. Металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) стерилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомендуется обертывать ватой.

Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные петли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, стерилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.

Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не произошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Прокаливание в целом занимает 5-7 с.

Подготовка к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты. Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой печи при температуре 160°С в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.

Перед стерилизацией бумагу и марлю нарезают кусочками, а вату сворачивают в виде шариков или тампонов нужной величины. После этого каждый вид материала в отдельности по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве пакета стерилизованный материал следует стерилизовать повторно, так как стерильность его нарушается.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Изделия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в течение 30 минут; при загрязнении спороносной микрофлорой-в автоклаве при давлении 1,5-2 атм. в течение 30 или 20 минут. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и снаружи пересыпают тальком для предохранения их от склеивания. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде помещают в биксы.

Стерилизация патогенных культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для дальнейшей работы, складывают в металлический бак, пломбируют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 минут при давлении 1 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производится специально выделенным лицом под расписку. Режим стерилизации регистрируется в специальном журнале. При уничтожении культур микробов I и II групп патогенности, а также материала, зараженного или подозрительного на зараженность возбудителями, отнесенными к этим группам, баки с отработанным материалом переносят на металлических подносах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.

Виды стерилизации

Стерилизация кипячением. Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. (Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы-в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия). Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огне 30-60 минут. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.

Стерилизация сухим жаром. Стерилизация сухим жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилизации материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обогрев. Продолжительность стерилизации при температуре 150°С 2 ч, при 165°С – 1 ч, при 180°С – 40 мин, при 200°С – 10-15 мин (при 170°С бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются). Началом стерилизации считается тот момент, когда температура в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование трещин на горячей посуде.

Стерилизация паром под давлением. Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Автоклав состоит из двух котлов, вставленных один в другой, кожуха и крышки. Наружный котел называют водопаровой камерой, внутренний - стерилизационной камерой. В водопаровом котле происходит образование пара. Во внутренний котел помещают стерилизуемый материал. В верхней части стерилизационного котла имеются небольшие отверстия, через которые проходит пар из водопаровой камеры. Крышка автоклава герметически привинчивается к кожуху. Кроме перечисленных основных частей, автоклав имеет ряд деталей, регулирующих его работу: манометр, водомерное стекло, предохранительный клапан, выпускной, воздушный и конденсационный краны. Манометр служит для определения давления, создающегося в стерилизационной камере. Нормальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимается за нуль, поэтому в неработающем автоклаве стрелка манометра стоит на нуле. Между показаниями манометра и температурой имеется определенная зависимость (табл. 2).

Таблица 2.

Соотношения показаний манометра и температуры кипения воды

Красная черта на шкале манометра определяет максимальное рабочее давление, которое допускается в автоклаве. Предохранительный клапан служит для предохранения от чрезмерного повышения давления. Его устанавливают на заданное давление, то есть, давление, при котором нужно производить стерилизацию, при переходе стрелки манометра за черту клапан автоклава автоматически открывается и выпускает лишний пар, замедляя тем самым дальнейший подъем давления.

На боковой стенке автоклава имеется водомерное стекло, показывающее уровень воды в водопаровом котле. На трубке водомерного стекла нанесены две горизонтальные черты - нижняя и верхняя, обозначающие соответственно допускаемый нижний и верхний уровень воды в водопаровой камере. Воздушный кран предназначен для удаления воздуха из стерилизационной и водопаровой камер в начале стерилизации, так как воздух, являясь плохим проводником тепла, нарушает режим стерилизации. На дне автоклава находится конденсационный кран для освобождения стерилизационной камеры от конденсата, образующегося в период нагревания стерилизуемого материала.

Правила работы с автоклавом. Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измерительную аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: нижнюю стрелку ставят на 0,1 атм. ниже, верхнюю-на 0,1 атм. выше рабочего давления, водопаровую камеру заполняют водой до верхней отметки мерного стекла. В период заполнения водой вентиль на трубе, по которой пар поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла. Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым материалом. После этого крышку (или дверцу) автоклава закрывают, плотно закрепляя центральным затвором или болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на трубе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит отдельными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления.

Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне. По окончании времени стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медленно ослабляют прижимные приспособления и открывают крышку автоклава.

Температура и продолжительность стерилизации определяются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.

Контроль температуры в стерилизационной камере осуществляется периодически с помощью бактериологических тестов. Биотесты изготовляются бактериологическими лабораториями ЦСЭН. В случае непрохождения данных тестов производят проверку технического состояния автоклава.

Стерилизация текучим паром. Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняют на 2/3 водой (для спуска оставшейся после стерилизации воды есть кран). Крышка аппарата имеет в центре отверстие для термометра и несколько небольших отверстий для выхода пара. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта его с паром. Началом стерилизации считается время с момента закипания воды и поступления пара в стерилизационную камеру. В текучепаровом аппарате стерилизуют, главным образом, питательные среды, свойства которых изменяются при температуре выше 100°С. Стерилизацию текучим паром следует проводить повторно, так как однократное прогревание при температуре 100°С не обеспечивает полного обеззараживания. Такой метод получил название дробной стерилизации: обработку стерилизуемого материала текучим паром проводят по 30 минут ежедневно в течение 3 дней. В промежутках между стерилизациями материал выдерживают при комнатной температуре для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.

Тиндализация. Тиндализация-дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемoгo материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60-65°С в течение 5 дней или при 70- 80°C в течение 3 дней. В промежутках между прогреваниями обрабатываемый материал выдерживают при температуре 25°С для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях. Тиндализацией пользуются для обеспложивания питательных сред, содержащих белок.

Механическая стерилизация с помощью бактериальных ультрафильтров . Бактериальные фильтры применяют для освобождения жидкости от находящихся в ней бактерий, а также для отделения бактерий от вирусов, фагов и экзотоксинов. Вирусы бактериальными фильтрами не задерживаются, и поэтому ультрафильтрацию нельзя рассматривать как стерилизацию в принятом значении этого слова. Для изготовления ультрафильтров применяют мелкопористые материалы (каолин, асбест, нитроцеллюлоза и др.), способные задерживать бактерии.

Асбестовые фильтры (фильтры Зейтца) представляют собой асбестовые пластинки толщиной 3-5 мм и диаметром 35 и 140 мм для фильтрации малых и больших объемов жидкости. В нашей стране асбестовые фильтры, изготовляют двух марок: «Ф» (фильтрующие), задерживающие взвешенные частицы, но пропускающие бактерии, и «СФ» (стерилизующие), более плотные, задерживающие бактерии. Перед употреблением асбестовые фильтры монтируют в фильтровальные аппараты и вместе с ними стерилизуют в автоклаве. Асбестовые фильтры используются однократно. Мембранные ультрафильтры изготавливаются из нитроцеллюлозы и представляют собой диски белого цвета диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм.

Бактериальные фильтры различаются по величине пор и обозначаются порядковыми номерами (табл. 3).

Таблица 3.

Бактериальные фильтры

Непосредственно перед употреблением мембранные фильтры стерилизуют кипячением. Фильтры помещают в дистиллированную воду, подогретую до температуры 50- 60°С, чтобы предупредить их скручивание, кипятят на слабом огне в течение 30 минут, меняя 2-3 раза воду. Простерилизованные фильтры во избежание их повреждения вынимают из стерилизатора фламбированным и остуженным пинцетом с гладкими кончиками.

Для фильтрации жидкостей бактериальные фильтры монтируют в специальные фильтровальные приборы, в частности, в фильтр Зейтца.

Он состоит из 2-х частей: верхней, имеющей форму цилиндра или воронки, и нижней-опорной части аппарата, с так называемым фильтровальным столиком из металлической сетки или чистой керамической пластинки, на которую помещают мембранный или асбестовый фильтр. Опорная часть аппарата имеет форму воронки, суживающаяся часть которой находится в резиновой пробке горлышка колбы Бунзена. В рабочем состоянии верхнюю часть прибора фиксируют на нижней с помощью винтов. Перед началом фильтрации места соединения различных частей установки для создания герметичности заливают парафином. Отводную трубку колбы присоединяют толстостенной резиновой трубкой к водоструйному, масляному или велосипедному нacocy. После этого в цилиндр или воронку аппарата наливают фильтруемую жидкость и включают насос, создающий вакуум в приемном сосуде. В результате образующейся разности давлений фильтруемая жидкость проходит через поры фильтра в приемник. Микроорганизмы остаются на поверхности фильтра.

Приготовление мазков

Для изучения микроорганизмов в окрашенном виде на предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют его и после этого окрашивают.

Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла.

Мазки готовят из культур микробов, патологического материала (мокрота, гной, моча, кровь и др.) и из органов трупов.

Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала.

Приготовление мазков из микробных культур с жидкой питательной средой и из жидкого патологического материала (моча, ликвор и др.). Маленькую каплю исследуемой жидкости наносят бактериальной петлей на предметное стекло и круговыми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром в копеечную монету.

Приготовление мазков из крови. На предметное стекло, ближе к одному из его концов, наносят каплю крови. Второе - шлифованное - стекло, которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно распределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. Толщина мазка зависит от величины угла между стеклами: чем острее угол, тем тоньше мазок. Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и одинаковую толщину на всем протяжении.

Приготовление толстой капли. На середину предметного стекла пастеровской пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к выступающей капле крови. Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериальной петлей так, чтобы диаметр образующегося мазка соответствовал величине копеечной монеты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до высыхания крови. Кровь в «толстой капле» распределяется неравномерно, образуя неровный край.

Приготовление мазка из вязкого материала (мокрота, гной). Мокроту или гной, нанесенные на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг другу.

После этого свободные концы стекол захватывают 1 и 2 пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу. Получаются мазки с равномерно распределенным материалом, занимающим большую площадь.

Приготовление мазка из культур с плотных питательных сред. На середину чистого, хорошо обезжиренного предметного стекла наносят каплю воды, в нее вносят бактериальную петлю с небольшим количеством исследуемой микробной культуры, так, чтобы капля жидкости стала слегка мутноватой. После этого излишек микробного материала на петле сжигают в пламени и приступают к приготовлению мазка по вышеописанному способу.

Приготовление мазков из органов и тканей. Поверхность органа с целью обеззараживания прижигают накаленными браншами пинцета, делают по этому месту надрез и из глубины остроконечными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами. Далее поступают так же, как при приготовлении мазка из гноя и мокроты. Если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают скальпелем соскоб. Полученный при соскабливании материал распределяют тонким слоем по поверхности стекла скальпелем или бактериальной петлей.

Для изучения взаимного расположения элементов ткани и находящихся в ней микроорганизмов делают мазки-отпечатки. Для этого вырезанный из середины органа небольшой кусочек ткани захватывают пинцетом и прикладывают последовательно несколько раз поверхностью среза к предметному стеклу, получая, таким образом, ряд мазков-отпечатков.

Высушивание и фиксация мазков. Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение средств, вызывающих коагуляцию белков. Нельзя фиксировать над пламенем мазки, содержащие возбудителей I – II групп патогенности.

Физический способ фиксации. Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за ребра мазком кверху и плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с. Надежность фиксации проверяют следующим простым приемом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога.

Химический способ фиксации. Для фиксации мазков применяют также химические вещества и соединения, приведенные в таблице 4.

Таблица 4.

Вещества для химической фиксации

Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом и затем высушивают на воздухе.

Окраска мазков

Техника окраски мазков. Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, что предложено А.И. Синевым. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящей бумаги в течение неограниченно долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски.

Окраска мазков красящей бумагой. На высушенный и фиксированный препарат наносят несколько капель воды, кладут окрашенные бумажки величиной 2´2 см. В течение всего времени окрашивания бумага должна оставаться влажной и плотно прилегать к поверхности стекла. При подсыхании бумагу дополнительно смачивают водой. Продолжительность окрашивания мазка определяется методом окраски. По окончании окраски бумагу осторожно снимают пинцетом, а мазок промывают водопроводной водой и подсушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.

Окраска мазков растворами красителей. На высушенный и фиксированный препарат пипеткой наносят краситель в таком количестве, чтобы он покрывал весь мазок. При окраске мазков концентрированными растворами красителей (карболовый фуксин Циля, карболовый генциановый или кристаллический фиолетовый) окрашивание производят через фильтровальную бумагу, задерживающую частицы красителя: на фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают раствор красителя.

Для микроскопического исследования приготовленные мазки, высушенные и зафиксированные, подвергают окраске. Окраска бывает простая и сложная. Простая окраска заключается в нанесении на мазок какой-либо одной краски на определенный промежуток времени. Чаще всего для простой окраски применяют спирто-водный (1:10) фуксин Пфейффера, леффлеровскую метиленовую синьку и сафранин. Эозин, как кислая краска, употребляется только для окраски цитоплазмы клеток и подкраски фона. Кислый фуксин совершенно непригоден для окраски бактерий.