Язва желудка 

Стволовые клетки и их применение. Серьезный выбор клиники. Лечение стволовыми клетками различных заболеваний – общие принципы и эффекты

16.05.2013 / в / от

Какие бывают стволовые клетки?

О стволовых клетках написано много, как познавательных, так и глубоко научных статей. Однако необходимо коснуться этого вопроса еще раз и напомнить читателю о основных видах стволовых клеток. Для простоты часть материала взята из открытого источника Википедия .

Классификация стволовых клеток

Стволовые клетки можно разделить на три основные группы в зависимости от источника их получения: эмбриональные, фетальные и постнатальные (стволовые клетки взрослого организма).

Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) образуют внутреннюю клеточную массу (ВКМ), или эмбриобласт , на ранней стадии развития эмбриона. Они являются плюрипотентными . Важный плюс ЭСК состоит в том, что они не экспрессируют HLA (human leucocyte antigens), то есть не вырабатывают антигены тканевой совместимости. Каждый человек обладает уникальным набором этих антигенов, и их несовпадение у донора и реципиента является важнейшей причиной несовместимости при трансплантации. Соответственно, шанс того, что донорские эмбриональные клетки будут отторгнуты организмом реципиента очень невысок. Следует отметить, что клинические испытания с применением дифференцированных дериватов (производных клеток) ЭСК уже начаты. Для получения ЭСК в лабораторных условиях приходится разрушать бластоцисту , чтобы выделить ВКМ, то есть разрушать эмбрион. Поэтому исследователи предпочитают работать не с эмбрионами непосредственно, а с готовыми, ранее выделенными линиями ЭСК.

Клинические исследования с использованием ЭСК подвергаются особой этической экспертизе. Во многих странах исследования ЭСК ограничены законодательством.

Одним из главных недостатков ЭСК является невозможность использования аутогенного, то есть собственного материала, при трансплантации, поскольку выделение ЭСК из эмбриона несовместимо с его дальнейшим развитием.

Фетальные стволовые клетки

Фетальные стволовые клетки получают из плодного материала после аборта (обычно срок гестации, то есть внутриутробного развития плода, составляет 9-12 недель). Естественно, изучение и использование такого биоматериала также порождает этические проблемы. В некоторых странах, например, на Украине и в Великобритании, продолжаются работы по их изучению и клиническому применению. К примеру, британская компания ReNeuron исследует возможности использования фетальных стволовых клеток для терапии инсульта.

Постнатальные стволовые клетки

Несмотря на то, что стволовые клетки зрелого организма обладают меньшей потентностью в сравнении с эмбриональными и фетальными стволовыми клетками, то есть могут порождать меньшее количество различных типов клеток, этический аспект их исследования и применения не вызывает серьёзной полемики.

Кроме того, возможность использования аутогенного материала обеспечивает эффективность и безопасность лечения. Стволовые клетки взрослого организма можно подразделить на три основных группы: гемопоэтические (кроветворные), мультипотентные мезенхимальные (стромальные) и тканеспецифичные клетки-предшественницы . Иногда в отдельную группу выделяют клетки пуповинной крови, поскольку они являются наименее дифференцированными из всех клеток зрелого организма, то есть обладают наибольшей потентностью.

Пуповинная кровь в основном содержит гемопоэтические стволовые клетки, а также мультипотентные мезенхимальные, но в ней присутствуют и другие уникальные разновидности стволовых клеток, при определённых условиях способные дифференцироваться в клетки различных органов и тканей.

Гемопоэтические стволовые клетки

Гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) - мультипотентные стволовые клетки, дающие начало всем клеткам крови миелоидного (моноциты, макрофаги, нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, эритроциты, мегакариоциты и тромбоциты, дендритные клетки) и лимфоидного рядов (Т-лимфоциты, В-лимфоциты и естественные киллеры).

Определение гемопоэтических клеток было основательно пересмотрено в течение последних 20 лет. Гемопоэтическая ткань содержит клетки с долгосрочными и краткосрочными возможностями к регенерации, включая мультипотентные, олигопотентные и клетки-предшественники. Миелоидная ткань содержит одну ГСК на 10 000 клеток. ГСК являются неоднородной популяцией.

Различают три субпопуляции ГСК, в соответствии с пропорциональным отношением лимфоидного потомства к миелоидному (Л/M). У миелоидно ориентированных ГСК низкое Л/М соотношение (>0, <3), у лимфоидно ориентированных — высокое (>10). Третья группа состоит из «сбалансированных» ГСК, для которых 3 ≤ Л/M ≤ 10. В настоящее время активно исследуются свойства различных групп ГСК, однако промежуточные результаты показывают, что только миелоидно ориентированные и «сбалансированные» ГСК способны к продолжительному самовоспроизведению.

Кроме того, эксперименты по трансплантации показали, что каждая группа ГСК преимущественно воссоздаёт свой тип клеток крови, что позволяет предположить наличие наследуемой эпигенетической программы для каждой субпопуляции.

До начала использования пуповинной крови основным источником ГСК считался костный мозг . Этот источник и сегодня достаточно широко используется в трансплантологии . ГСК располагаются в костном мозге у взрослых, включая бедренные кости, рёбра, мобилизации грудины и другие кости. Клетки могут быть получены непосредственно из бедра при помощи иглы и шприца, или из крови после предварительной обработки цитокинами, включая G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), способствующий высвобождению клеток из костного мозга.

Вторым, наиболее важным и перспективным источником ГСК является пуповинная кровь. Концентрация ГСК в пуповинной крови в десять раз выше, чем в костном мозге. Кроме того, у этого источника есть ряд преимуществ. Важнейшие из них:

  • Возраст. Пуповинная кровь собирается на самом раннем этапе жизни организма. ГСК пуповинной крови максимально активны, поскольку не подвергались негативному воздействию внешней среды (инфекционные заболевания, нездоровое питание и т. д.). ГСК пуповинной крови способны создать большую клеточную популяцию в короткий срок.
  • Совместимость. Использование аутологичного материала, то есть собственной пуповинной крови гарантирует 100%-ную совместимость. Совместимость с братьями и сёстрами составляет до 25 %, как правило, возможно также использование пуповинной крови ребёнка для лечения других близких родственников. Для сравнения, вероятность нахождения подходящего донора стволовых клеток - от 1:1000 до 1:1000 000.

Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки

Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК) - мультипотентные стволовые клетки, способные дифференцироваться в остеобласты (клетки костной ткани), хондроциты (хрящевые клетки) и адипоциты (жировые клетки), кардиомиоциты, нервная ткань, гепатоциты. Свойства ММСК постоянно изучаются и с каждым годом открываются новые способности превращения этих клеток в другие типы клеток и тканей.

Предшественниками ММСК в эмбриогенный период развития являются мезенхимальные стволовые клетки (МСК). Они могут быть обнаружены в местах распространения мезенхимы , то есть зародышевой соединительной ткани.

Основным источником ММСК является костный мозг. Кроме того, они обнаружены в жировой ткани и ряде других тканей с хорошим кровоснабжением. Существует ряд доказательств того, что естественная тканевая ниша ММСК расположена периваскулярно - вокруг кровеносных сосудов. Кроме того, ММСК были обнаружены в пульпе молочных зубов, амниотической (околоплодной) жидкости, пуповинной крови и вартоновом студне. Эти источники исследуются, но редко применяются на практике.

Например, выделение молодых ММСК из вартонова студня представляет собой крайне трудоёмкий процесс, поскольку клетки в нём также располагаются периваскулярно. В 2005-2006 годах специалисты по ММСК официально определили ряд параметров, которым должны соответствовать клетки, чтобы отнести их к популяции ММСК. Были опубликованы статьи, в которых представлен иммунофенотип ММСК и направления ортодоксальной дифференцировки. К ним относится дифференцировка в клетки костной, жировой и хрящевой тканей.

Был проведён ряд экспериментов по дифференцировке ММСК в нейроноподобные клетки, но исследователи по-прежнему сомневаются, что полученные нейроны являются функциональными. Эксперименты также проводятся в области дифференцировки ММСК в миоциты - клетки мышечной ткани. Важнейшей и наиболее перспективной областью клинического применения ММСК является котрансплантация совместно с ГСК в целях улучшения приживления образца костного мозга или стволовых клеток пуповинной крови.

Многочисленные исследования показали, что ММСК человека могут избегать отторжения при трансплантации, вступать во взаимодействие с дендритными клетками и Т-лимфоцитами и создавать иммуносупрессивную микросреду посредством выработки цитокинов.

Было доказано, что иммуномодулирующие функции ММСК человека повышаются, когда их пересаживают в воспалённую среду с повышенным уровнем гамма-интерферона. Другие исследования противоречат этим выводам, что обусловлено гетерогенной природой изолированных МСК и значительными различиями между ними, в зависимости от способа культивирования.

Тканеспецифичные прогениторные клетки

Тканеспецифичные прогениторные клетки (клетки-предшественницы) - малодифференцированные клетки, которые располагаются в различных тканях и органах и отвечают за обновление их клеточной популяции, то есть замещают погибшие клетки. К ним, например, относятся миосателлитоциты (предшественники мышечных волокон), клетки-предшественницы лимфо- и миелопоэза . Эти клетки являются олиго- и унипотентными и их главное отличие от других стволовых клеток в том, что клетки-предшественницы могут делиться лишь определённое количество раз, в то время как другие стволовые клетки способны к неограниченному самообновлению. Поэтому их принадлежность к истинно стволовым клеткам подвергается сомнению. Отдельно исследуются нейральные стволовые клетки, которые также относятся к группе тканеспецифичных. Они дифференцируются в процессе развития эмбриона и в плодный период, в результате чего происходит формирование всех нервных структур будущего взрослого организма, включая центральную и периферическую нервные системы. Эти клетки были обнаружены и в ЦНС взрослого организма, в частности, в субэпендимальной зоне, в гиппокампе, обонятельном мозге и т. д. Несмотря на то, что большая часть погибших нейронов не замещается, процесс нейрогенеза во взрослой ЦНС всё-таки возможен за счёт нейральных стволовых клеток, то есть популяция нейронов может «восстанавливаться», однако это происходит в таком объёме, что не сказывается существенно на исходах патологических процессов.

Помимо вышеперечисленных типов стволовых клеток из традиционных источников в последнее время появился новый источник – это Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (induced pluripotent stem cells, iPSC или iPS).

Этот совершенно новый тип удалось получить из клеток различных тканей (в первую очередь фибробластов) с помощью их перепрограммирования методами генетической инженерии.

В ранних работах iPS пытались получить путём слияния «взрослых» клеток с ЭСК. В 2006 г были получены iPS из сперматогониев мышей и людей.

В 2008 г были разработаны методы перепрограммирования «взрослых» клеток путем введения в них «эмбриональных» генов (в первую очередь генов транскрипционных факторов Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc и Nanog) с помощью аденовирусов и других векторов» При этом выяснилось, что перепрограммирование может индуцироваться временной экспрессией введённых генов, без их встраивания в геном клеток. Перепрограммирование клеток с целью превращения их в iPS было признано журналом Science главным научным прорывом 2008 г.

В 2009 году была опубликована работа, в которой с помощью метода тетраплоидной комплементации впервые было показано, что iPS могут давать полноценный организм, в том числе и его клетки зародышевого пути. iPS, полученные из фибробластов кожи мышей с помощью трансформации с использованием ретровирусного вектора, в некотором проценте случаев дали здоровых взрослых мышей, которые были способны нормально размножаться. Таким образом, впервые были получены клонированные животные без примеси генетического материала яйцеклеток (при стандартной процедуре клонирования митохондриальная ДНК передается потомству от яйцеклетки реципиента).

Синъя Яманака - японский ученый, профессор Института передовых медицинских наук (Institute for Frontier Medical Sciences) в Университете Киото, директор Центра по исследованию и применению iPS-клеток (Center for iPS Cell Research and Application (CiRA)) Университета Киото, ведущий исследователь Института сердечно-сосудистых заболеваний Гладстона, Сан-Франциско.

Лауреат Нобелевской премии по физиологии и медицине 2012 года.

В 2006 году впервые в мире получил индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPS-клетки) , благодаря чему приобрел всемирную известность, а в 2012 году получил за эти работы совместно с английским учёным Джоном Гёрдоном нобелевскую премию по физиологии или медицине.

Заканчивая краткий обзор типов стволовых клеток необходимо отметить, что в клинической практике для лечения заболеваний применяются не все виды клеток и не для любых заболеваний .

Наиболее «безопасными» для применения в медицинской практике считаются аутологичные (собственные) клетки пациента полученные из жировой ткани, костного мозга или пуповинной крови, остальные типы клеток проходят разные стадии клинических испытаний и вероятно в скором времени займут свое место в арсенале лечебных инструментов клеточной терапии.

Теги:

ольга лукинская

О стволовых клетках в последние годы приходится слышать в самом разном контексте: их предлагают использовать в косметических процедурах и даже добавляют в кремы, учатся добывать из молочных зубов и пуповины, используют в лечении самых разных заболеваний. Часто в новостях сообщают о новых возможностях их использования, которые ещё долго предстоит изучать в лаборатории; в итоге одним стволовые клетки представляются чем-то из будущего, а другим кажется, что они уже стали обыденностью и используются в любом салоне красоты. Разбираемся, что вообще представляют собой стволовые клетки, для чего они часто применяются уже сейчас и какая польза возможна пока только в теории.


Откуда добывают
стволовые клетки

Стволовые клетки - это так называемые недифференцированные клетки, которые могут превращаться в разные клетки организма - а у человека их более двухсот - с различными свойственными им функциями. Например, у нервных клеток или клеток крови есть узкие, специфические задачи - и всю энергию они тратят на выполнение этих задач, не растрачиваясь на размножение. А новые эритроциты или нейроны возникают из стволовых клеток, которые есть у каждого человека в любом возрасте. Они бывают разных видов : одни способны дифференцироваться только в один тип клеток, другие - в несколько; стволовые клетки эмбриона на раннем сроке беременности могут преобразоваться в любой тип клеток организма.

Среди учёных ведутся терминологические споры о том, можно ли все эти клетки называть стволовыми и синонимичны ли термины «стволовая клетка» и «клетка-предшественник», но в целом оба термина могут использоваться равноценно. Речь идёт о базовых клетках, способных превращаться в любые другие - а значит, если научиться правильно с ними обращаться, потенциально могут позволить вырастить новую кожу на месте ожога или заменить пострадавшую в результате гепатита ткань печени. К сожалению, использовать стволовые клетки в таких целях пока не получается - но всё же есть ряд серьёзных проблем, которые они помогают решить. Получать стволовые клетки можно из эмбрионов (например, для исследовательских целей могут использоваться абортивные материалы), а у взрослых людей их основной источник - костный мозг. Стволовые клетки также активно выделяют из пульпы зубов и из пуповины новорождённых.

Для чего их используют

Стволовые клетки уже несколько десятилетий используют в лечении тяжёлых заболеваний крови и костного мозга, например лейкозов. Костный мозг - это орган кроветворения; по сути, он и состоит из стволовых клеток. Когда он не функционирует или производит «дефектные» клетки крови, один из вариантов лечения - трансплантация, то есть «замена» стволовых клеток костного мозга здоровыми. Для этого могут использоваться как донорские клетки, так и собственные, если они прошли определённую обработку.

  • 1908: термин «стволовая клетка» (Stammzelle) был предложен к широкому использованию русским гистологом Александром Максимовым (1874-1928). Он описал и доказал методами своего времени гемопоэтические стволовые клетки , именно для них был введён термин.
  • 1960-е: Джозеф Альтман и Гопал Д. Дас () представили научное доказательство нейрогенеза во взрослом организме, постоянной активности стволовых клеток мозга . Их выводы противоречили догме Рамон-и-Кахаля о том, что нервные клетки не рождаются во взрослом организме, и не получили широкой огласки.
  • 1963: Эрнест Маккаллох и Джеймс Тилл продемонстрировали присутствие самообновляющихся клеток в костном мозге мыши.
  • 1968: доказана возможность восстановления кроветворения у реципиента после трансплантации костного мозга. Трансплантация костного мозга восьмилетнему мальчику приводит к исцелению от тяжёлой формы иммунодефицита. Донором стала сестра с совместимым набором лейкоцитарных антигенов (HLA).
  • 1970: Фриденштейн Александр Яковлевич выделил из костного мозга морских свинок, успешно культивировал и описал фибробластоподобные клетки, получившие в последующем название Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки .
  • 1978: в пуповинной крови обнаружены гемопоэтические стволовые клетки.
  • 1981: эмбриональные клетки мыши получены из эмбриобласта (внутренней клеточной массы бластоцисты) учёными Мартином Эвансом , Мэттью Кауфманом и, независимо от них, Гэйл Р. Мартин. Введение в обиход термина «эмбриональная стволовая клетка» приписывается Гэйл Мартин.
  • 1988: Элиан Глюкман провела первую успешную трансплантацию ГСК пуповинной крови пациенту, больному анемией Фанкони . Э. Глюкман доказала, что применение пуповинной крови эффективно и безопасно. С тех пор пуповинная кровь широко применяется в трансплантологии .
  • 1992: нейральные стволовые клетки получены in vitro . Разработаны протоколы их культивирования в виде нейросфер .
  • 1992: первая именная коллекция стволовых клеток. Профессор Дэвид Харрис заморозил стволовые клетки пуповинной крови своего первенца. Сегодня Дэвид Харрис - директор крупнейшего в мире банка стволовых клеток пуповинной крови.
  • 1987-1997: За 10 лет в 45 медицинских центрах мира проведено 143 трансплантации пуповинной крови.
  • 1997: в России проведена первая операция онкологическому больному по пересадке стволовых клеток пуповинной крови.
  • 1998: Джеймс Томсон и его сотрудники из Висконсинского университета в Мадисоне вывели первую линию человеческих ЭСК.
  • 1998: первая в мире трансплантация аутологичных стволовых клеток пуповинной крови девочке с нейробластомой (опухолью мозга). Общее число проведенных операций по трансплантации пуповинной крови к этому году превышает 600.
  • 1999: журнал Science признал открытие эмбриональных стволовых клеток третьим по значимости событием в биологии после расшифровки двойной спирали ДНК и проекта «Геном человека» .
  • 2000: вышел ряд статей о пластичности стволовых клеток зрелого организма, то есть их способности дифференцироваться в клеточные компоненты различных тканей и органов.
  • 2003: журнал Национальной Академии Наук США (PNAS USA) опубликовал сообщение о том, что через 15 лет хранения в жидком азоте стволовые клетки пуповинной крови полностью сохраняют свои биологические свойства. С этого момента криогенное хранение стволовых клеток стало рассматриваться как «биологическая страховка». Мировая коллекция стволовых клеток, хранящихся в банках , достигла 72000 образцов. По данным на сентябрь 2003 г. в мире произведено уже 2592 трансплантаций стволовых клеток пуповинной крови, из них 1012 - взрослым пациентам.
  • За период с 1996 года по 2004 год были выполнены 392 трансплантации аутологичных (собственных) стволовых клеток.
  • 2005: учёные из Калифорнийского университета в Ирвайне произвели инъекцию нейральных стволовых клеток человека крысам с травматическим повреждением спинного мозга , и смогли частично восстановить способность крыс передвигаться.
  • 2005: перечень заболеваний, при лечении которых была успешно применена трансплантация стволовых клеток, достигает нескольких десятков. Основное внимание уделяется лечению злокачественных новообразований , различных форм лейкозов и других болезней крови . Появляются сообщения об успешной трансплантации стволовых клеток при заболеваниях сердечно-сосудистой и нервной систем. В различных исследовательских центрах проводятся исследования по применению стволовых клеток при лечении инфаркта миокарда и сердечной недостаточности . Разработаны международные протоколы лечения рассеянного склероза . Ищутся подходы к лечению инсульта , болезней Паркинсона и Альцгеймера .
  • Август 2006: журнал Cell публикует исследование Кадзутоси Такахаси и Синъя Яманака, посвящённое способу возвращения дифференцированных клеток в плюрипотентное состояние. Начинается эра индуцированных плюрипотентных стволовых клеток .
  • Январь 2007: исследователи из Университета Уэйк Форест (Северная Каролина , США) под руководством доктора Энтони Атала из Гарварда сообщили об открытии нового вида стволовых клеток, обнаруженных в амниотической жидкости (околоплодных водах). Они могут стать потенциальной заменой ЭСК в исследованиях и терапии.
  • Июнь 2007: три независимые исследовательские группы сообщили, что зрелые клетки кожи мышей могут быть репрограммированы в состояние ЭСК. В том же месяце учёный Шухрат Миталипов заявил о создании линии стволовых клеток примата путём терапевтического клонирования .
  • Ноябрь 2007: в журнале Cell опубликовано исследование Катсутоши Такагаши и Шинья Яманака «Индукция плюрипотентных стволовых клеток из фибробластов зрелого человека при определённых факторах», а в журнале Science вышла статья «Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, выведенные из соматических клеток человека» Джунинга Ю, в соавторстве с другими учёными из исследовательской группы Джеймса Томсона. Было доказано, что возможно индуцировать практически любую зрелую клетку человека и придать ей свойства стволовой, вследствие чего необходимость разрушения эмбрионов в лаборатории отпала, хотя предстоить определить риски канцерогенеза в связи с геном Мус и ретровирусным переносом генов.
  • Январь 2008: Роберт Ланза и его коллеги из Advanced Cell Technology и Калифорнийского университета в Сан-Франциско вывели первые ЭСК человека без разрушения эмбриона.
  • Январь 2008: посредством терапевтического клонирования культивированы клонированные бластоцисты человека.
  • Февраль 2008: плюрипотентные стволовые клетки выведены из печени и желудка мыши , эти индуцированные клетки ближе к эмбриональным, чем индуцированные стволовые клетки, выведенные ранее и они не канцерогенны. Кроме того, гены, необходимые для индуцирования плюрипотентных клеток нет необходимости помещать в определённую область, что способствует развитию невирусних технологий репрограммирования клеток.
  • Март 2008: впервые опубликовано исследование врачей из Института регенеративной медицины (Regenerative Sciences Institute), посвящённое успешной регенерации хряща в коленном суставе человека при использовании аутологичных зрелых МСК.
  • Октябрь 2008: Забине Конрад и её коллеги из Тюбингена (Германия) вывели плюрипотентные стволовые клетки из сперматогониальных клеток зрелого яичка человека путём культивирования in vitro с добавлением ФИЛ (фактора ингибирования (подавления) лейкемии).
  • 30 октября 2008: эмбрионоподобные стволовые клетки выведены из человеческого волоса .
  • 1 марта 2009: Андреаш Надь, Кэйсукэ Кадзи и их коллеги открыли способ выведения эмбрионоподобных стволовых клеток из обычных зрелых клеток с использованием инновационной технологии «обёртывания» для доставки специфических генов в клетки с целью репрограммирования без рисков, которые возникают при использовании вирусов . Помещение генов в клетку осуществляется при помощи электропорации .
  • 28 мая 2009: Ким Гвансу и его коллеги из Гарварда заявили о том, что им удалось разработать способ манипулирования клетками кожи для выведения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с учётом индивидуальной специфики пациента, утверждая, что это «окончательное решение проблемы стволовых клеток».
  • 2011: израильский учёный Инбар Фридрих Бен-Нун возглавил группу учёных, которая вывела первые стволовые клетки вымирающих видов животных. Это прорыв и благодаря ему можно спасти виды, которым грозит исчезновение.
  • 2012: Введение пациентам стволовых клеток, взятых из их собственного костного мозга через три или семь дней после инфаркта миокарда, является хотя и безопасным, но неэффективным методом лечения, таковы результаты клинического исследования, проведенного при поддержке Национального института здоровья США. Однако исследования, проведенные немецкими специалистами в отделении кардиологии в Гамбурге, показали положительные результаты в лечении сердечной недостаточности, но не инфаркта миокарда.

Свойства

Все стволовые клетки обладают двумя неотъемлемыми свойствами:

  • Самообновление, то есть способность сохранять неизменный фенотип после деления (без дифференцировки).
  • Потентность (дифференцирующий потенциал), или способность давать потомство в виде специализированных типов клеток.

Самообновление

Существуют два механизма, поддерживающих популяцию стволовых клеток в организме:

  1. Асимметричное деление, при котором продуцируется одна и та же пара клеток (одна стволовая клетка и одна дифференцированная клетка).
  2. Стохастическое деление: одна стволовая клетка делится на две более специализированных.

Дифференцирующий потенциал

Дифференцирующий потенциал, или потентность, стволовых клеток - это способность производить определенное количество разных типов клеток. В соответствии с потентностью стволовые клетки делятся на следующие группы:

  • Тотипотентные (омнипотентные) стволовые клетки могут дифференцироваться в клетки эмбриональных и экстраэмбриональных тканей, организованные в виде трехмерных связанных структур (тканей, органов, систем органов, организма). Такие клетки могут дать начало полноценному жизнеспособному организму. К ним относится оплодотворённая яйцеклетка , или зигота. Клетки, образованные при первых нескольких циклах деления зиготы, также являются тотипотентными у большинства биологических видов. Однако к ним не относятся, например, круглые черви , зигота которых утрачивает тотипотентность при первом делении. У некоторых организмов дифференцированные клетки также могут обретать тотипотентность. Так, срезанную часть растения можно использовать для выращивания нового организма именно благодаря этому свойству.
  • Плюрипотентные стволовые клетки являются потомками тотипотентных и могут давать начало практически всем тканям и органам, за исключением экстраэмбриональных тканей (например, плаценты). Из этих стволовых клеток развиваются три зародышевых листка : эктодерма , мезодерма и энтодерма .
  • Мультипотентные стволовые клетки порождают клетки разных такней, но многообразие их видов ограничено пределами одного зародышевого листка.
  • Олигопотентные клетки могут дифференцироваться лишь в некоторые, близкие по свойствам, типы клеток. К ним, например, относятся клетки лимфоидного и миелоидного рядов, участвующие в процессе кроветворения .
  • Унипотентные клетки (клетки-предшественницы, бластные клетки) - незрелые клетки, которые, строго говоря, уже не являются стволовыми, так как могут производить лишь один тип клеток. Они способны к многократному самовоспроизведению, что делает их долговременным источником клеток одного конкретного типа и отличает от нестволовых. Однако их способность к самовоспроизведению ограничена определённым количеством делений, что также отличает их от истинно стволовых клеток. К клеткам-предшественницам относятся, к примеру, некоторые из миосателлитоцитов , участвующих в образовании скелетной и мышечной тканей.

Классификация

Стволовые клетки можно разделить на три основные группы в зависимости от источника их получения: эмбриональные, фетальные и постнатальные (стволовые клетки взрослого организма).

Эмбриональные стволовые клетки

Клинические исследования с использованием ЭСК подвергаются особой этической экспертизе . Во многих странах исследования ЭСК ограничены законодательством.

Одним из главных недостатков ЭСК является невозможность использования аутогенного, то есть собственного материала, при трансплантации, поскольку выделение ЭСК из эмбриона несовместимо с его дальнейшим развитием.

Фетальные стволовые клетки

Постнатальные стволовые клетки

Несмотря на то, что стволовые клетки зрелого организма обладают меньшей потентностью в сравнении с эмбриональными и фетальными стволовыми клетками, то есть могут порождать меньшее количество различных типов клеток, этический аспект их исследования и применения не вызывает серьёзной полемики . Кроме того, возможность использования аутогенного материала обеспечивает эффективность и безопасность лечения. Стволовые клетки взрослого организма можно подразделить на три основных группы: гемопоэтические (кроветворные), мультипотентные мезенхимальные (стромальные) и тканеспецифичные клетки-предшественницы . Иногда в отдельную группу выделяют клетки пуповинной крови, поскольку они являются наименее дифференцированными из всех клеток зрелого организма, то есть обладают наибольшей потентностью. Пуповинная кровь в основном содержит гемопоэтические стволовые клетки, а также мультипотентные мезенхимальные, но в ней присутствуют и другие уникальные разновидности стволовых клеток, при определённых условиях способные дифференцироваться в клетки различных органов и тканей.

Гемопоэтические стволовые клетки

До начала использования пуповинной крови основным источником ГСК считался костный мозг . Этот источник и сегодня достаточно широко используется в трансплантологии . ГСК располагаются в костном мозге у взрослых, включая бедренные кости , рёбра , мобилизации грудины и другие кости. Клетки могут быть получены непосредственно из бедра при помощи иглы и шприца, или из крови после предварительной обработки цитокинами , включая G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), способствующий высвобождению клеток из костного мозга.

Вторым, наиболее важным и перспективным источником ГСК является пуповинная кровь. Концентрация ГСК в пуповинной крови в десять раз выше, чем в костном мозге. Кроме того, у этого источника есть ряд преимуществ. Важнейшие из них:

  • Возраст. Пуповинная кровь собирается на самом раннем этапе жизни организма. ГСК пуповинной крови максимально активны, поскольку не подвергались негативному воздействию внешней среды (инфекционные заболевания , нездоровое питание и т. д.). ГСК пуповинной крови способны создать большую клеточную популяцию в короткий срок.
  • Совместимость. Использование аутологичного материала, то есть собственной пуповинной крови гарантирует 100%-ную совместимость. Совместимость с братьями и сёстрами составляет до 25 %, как правило, возможно также использование пуповинной крови ребёнка для лечения других близких родственников. Для сравнения, вероятность нахождения подходящего донора стволовых клеток - от 1:1000 до 1:1000 000.

Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки

Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК) - мультипотентные стволовые клетки, способные дифференцироваться в остеобласты (клетки костной ткани), хондроциты (хрящевые клетки) и адипоциты (жировые клетки).

Характеристики эмбриональных стволовых клеток

Стволовые клетки и рак

Использование в медицине

В России

Распоряжением Правительства РФ от 23 декабря 2009 г. № 2063-р Минздравосцразвития России, Минпромторгу России и Минобрнауки России поручено до конца 2010 г. разработать и представить на рассмотрение в Государственную думу РФ проект закона «О применении биомедицинских технологий в медицинской практике», регламентирующего медицинское применение стволовых клеток, как одной из биомедицинских технологий . Поскольку законопроект вызвал возмущение общественности и ученых, он был отправлен на доработку и на данный момент не принят.

1 июля 2010 года Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития выдала первое разрешение на применение новой медицинской технологии ФС № 2010/255 (лечение собственными стволовыми клетками).

3 февраля 2011 года Федеральная службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития выдала разрешение на применение новой медицинской технологии ФС № 2011/002 (лечение донорскими стволовыми клетками следующих патологий: возрастные изменения кожи лица второй или третьей степени, наличие раневого дефекта кожи, трофической язвы, лечение аллопеции, атрофическое поражение кожи, в том числе атрофические полосы (striae), ожоги, диабетической стопы)

На Украине

Сегодня на Украине разрешено проведение клинических испытаний (Приказ МЗ Украины № 630 «О проведении клинических испытаний стволовых клеток», 2007 г.

Прошло около полувека с того времени, когда ведущие школы отечественной гематологии впервые опубликовали данные о «вечных» клетках, дающих жизнь всему организму и поддерживающих ее от начала до конца. Но уровень научных знаний и технического оснащения лабораторий того времени не позволил сделать следующий шаг на пути исследования этих загадочных клеток. Их время наступило лишь в начале 90-х годов, когда ученые США повторно «открыли» стволовые клетки сначала в костном мозге, а затем и во всех органах и тканях высших животных. Когда же широкой общественности стало известно, что стволовые клетки могут быть внесены в организм искусственно, то ученый мир загудел, как растревоженный улей, а предприниматели от медицины немедленно приступили к освоению этой области.Что же такое стволовые клетки? Объяснить это можно так: стволовыми клетками называют универсальные клетки организма, способные при определенных условиях развиться в любой вид ткани и способствовать образованию любого органа - печени, почек, сердца, мозга и т.д.

Откуда же они берутся? Известно, что каждый человек произошел от соединения яйцеклетки и сперматозоида. То есть происхождению всего того, что у нас есть, мы обязаны двум клеткам, объединившимся в одну - зиготу. Именно она делится и дает начало клеткам, не имеющим других функций, кроме передачи генетического материала в следующие клеточные поколения. Это эмбриональные стволовые клетки. Из них развиваются все остальные высокодифференцированные клетки организма. После «распределения обязанностей» эти клетки закрываются для дальнейшего изменения и могут быть доступны только для «чтения», причем каждая в определенном формате: нервная клетка - это только нервная клетка, неспособная участвовать в создании эпителиальной ткани или входить в состав миокарда и т.п. В то же время некоторым стволовым клеткам удается все же ускользнуть от определенности и остаться доступными для дальнейшего изменения только в случае крайней необходимости.

Таким образом, стволовые клетки - это универсальный строительный материал, из которого произрастает все, что угодно. Пока человеческому организму хорошо, стволовые клетки свободно и независимо «блуждают» по его просторам. Но как только стволовые клетки получают генетический сигнал (неполадка, повреждение ткани или органа), они по кровяному руслу устремляются к пораженному органу, находят любое повреждение и превращаются на месте в необходимые организму клетки - костные, гладкомышечные, печеночные, нервные и т.д.

Человеческий организм содержит примерно 50 миллиардов стволовых клеток, которые регулярно обновляются. С годами количество таких живых «кирпичиков» сокращается - для них находится все больше работы, а заменить их нечем. Этот процесс начинается уже к 20 годам, а в 70 лет их остается совсем немного. Более того, стволовые клетки немолодого человека уже не так универсальны: в клетки крови они превратиться еще могут, а в нервные - уже нет. Но если удастся искусственным образом ввести стволовые клетки в организм, т.е. заменить ветхие или больные клетки,тогда вполне реально вернуть здоровье и даже значительно продлить жизнь человека.

Где же взять эти самые стволовые клетки для искусственного введения? Сегодня считается, что ученые могут получать стволовые клетки, культивировать и направлять их по нужному пути - для этого есть несколько способов:

Первый - человек может стать донором стволовых клеток для себя самого. Наибольшее их количество находится в костном мозге таза. Они извлекаются при помощи пункции, а затем в лабораторных условиях их особым образом активизируют, наращивают и вводят обратно в организм, где при участии специальных сигнальных веществ они направляются к «больному месту».

Вторым источником стволовых клеток является пуповинная кровь, собранная после рождения ребенка. Взяв ее из пуповины и поместив в специальное хранилище, стволовые клетки в дальнейшем можно использовать для восстановления практически любой ткани и органа этого человека, а также использовать их для лечения других пациентов при условии совместимости по антигенам.

Источником следующего вида стволовых клеток (фетальных) является абортивный материал 9-12 недели беременности. Этот источник на сегодняшний день используется наиболее часто. Но помимо этических и юридических трений, эти клетки иногда могут вызвать отторжение трансплантанта. Кроме того, использование непроверенного абортивного материала чревато заражением пациента вирусным гепатитом, СПИДом и т.п. Если же проводить диагностику материала на вирусы, увеличивается себестоимость метода, что в конечном итоге приводит к росту стоимости самого лечения.

И, наконец, еще одним источником «чудо-строителей» является бластоциста, которая формируется к 5-6 дню оплодотворения. Это эмбриональные стволовые клетки. Они наиболее универсальны, по сравнению со стволовыми клетками взрослых людей, и способны дифференцироваться абсолютно во все типы клеток организма. Положительной стороной использования этих универсальных стволовых клеток следует считать тот факт, что клетки как бы никому не принадлежат и не выполняют никаких специальных функций, а потому при пересадке не возникает реакция отторжения.

Это открытие предоставляет для медицины огромные возможности, но все-таки это дело будущего, ведь несмотря на многолетнюю работу ученых всего мира в этом направлении, достижения по-прежнему скромны. Истинная стволовая клетка, по-видимому, тем и отличается от других, что не несет на себе никаких специфических опознавательных знаков, оставаясь безликой до тех пор, пока не определится ее дальнейшая судьба. Но и определить искусственно эту судьбу, применив те или иные, порой очень сложные и трудоемкие, методы, удается чрезвычайно редко.

Есть и другой момент, заслуживающий внимания. Стволовая клетка по своим характеристикам очень напоминает опухолевую клетку. Отличие состоит лишь в том, что опухолевая клетка не желает созревать ни при каких обстоятельствах, продолжая делиться и наращивать массу себе подобных. Но где та грань, которая разделяет эти два типа клеток? В здоровом организме активно функционирует система безопасности. Ее деятельность приводит к потере дочерними клетками способности к безграничному самовоспроизведению и позволяет свести к минимуму вероятность возникновения злокачественной либо доброкачественной опухоли. Возникает реальная опасность получить при введении низкодифференцированных клеток извне их безудержное размножение в организме пациента и, как следствие, опухолевый рост. В научной литературе описано множество случаев именно такого развития событий.

Другой наиболее часто встречающейся проблемой при трансплантации тканей вообще и стволовых клеток различной степени зрелости в частности являются упомянутые уже осложнения иммунного характера, в том числе связанные с развитием реакции «трансплантат против хозяина». Отторжение и гибель пересаженных клеток относятся, пожалуй, к самому благоприятному исходу в данном случае.

Открытым остается также вопрос о регулировании дальнейшего поведения трансплантированных клеток в организме. В большинстве случаев ученые в ходе эксперимента не могут достоверно определить, какие из введенных клеток приживаются, а какие нет, чем обусловлены полученные эффекты и как избежать нежелательных направлений. Более того, в настоящее время не существует технологий, позволяющих быть абсолютно уверенными в том, что трансплантированные клетки попадают только в орган, нуждающийся во вмешательстве. Иными словами, никто на сто процентов не поручится, что в мышце не может вырасти кость, в то время как целью вмешательства было устранение косметического дефекта кожи. Ведь даже при использовании собственных клеток, полученных из костного мозга пациента и обработанных в лабораторных условиях, мы не можем достоверно определить, что происходит с клетками, извлеченными из привычного для них микроокружения и помещенными в искусственные питательные среды для «обогащения и активирования». Чем они обогащаются? Для чего активируются? Да и возможность заражения культуры стволовых клеток, готовящихся к реплантации, вирусами или другими микроорганизмами нельзя полностью исключить даже при соблюдении всех мер предосторожности в условиях научной лаборатории, не говоря уже о косметических салонах и стоматологических кабинетах.

Спасибо

Стволовые клетки в настоящее время представляют собой тему весьма оживленной дискуссии, ведущейся в обществе. Наверное, нет ни одного человека, который хотя бы не слышал термина "стволовые клетки". К сожалению, помимо знания этого термина, человек, как правило ничего не может сказать о том, что же такое стволовые клетки, каковы их свойства, как их получают и почему их можно использовать для лечения ряда заболеваний.

Данная ситуация сложилась потому, что подробной и емкой информации о предмете многочисленные телевизионные передачи, форумы и рекламы не предоставляют. Чаще всего информация о стволовых клетках представляется либо по типу рекламного ролика с восхвалением и возведением их в роль панацеи от всех заболеваний, либо же в передачах рассказывают о скандалах, которые, порой невероятными способами связываются все с теми же стволовыми клетками.

То есть, ситуация со стволовыми клетками подобна неким циркулирующим слухам о чем-то таинственном, но очень сильном, что может приносить огромное благо или не менее жуткое зло. Безусловно, это неправильно, и отражает только полное отсутствие объективной и комплексной информации у людей. Рассмотрим, что же такое стволовые клетки, зачем они нужны, как их получают, какими свойствами обладают и другие вопросы, так или иначе связанные с данными биологическими объектами.

Что такое стволовые клетки?

В общем виде можно сказать, что стволовые клетки – это структуры, обладающие способностью трансформироваться во взрослые и функционально активные клетки различных органов. Из стволовых клеток может вырасти и сформироваться и клетка печени (гепатоцит), и почки (нефроцит), и сердца (кардиомиоцит), и сосуда, и кости, и хряща, и матки , и яичника и т.д. То есть, по своей сути, стволовые клетки – это своеобразные резервные запасы, из которых по мере необходимости будут формироваться новые клетки различных органов взамен погибших или поврежденных.

Однако такое определение стволовых клеток очень общее, поскольку отражает только главную характерную черту данного типа клеток, помимо которой имеется множество других свойств, определяющих их разновидности. Чтобы ориентироваться в вопросе стволовых клеток и иметь о них относительно полное представление, необходимо знать эти их характерные свойства и разновидности.

Свойства и разновидности стволовых клеток

Основным свойством любой стволовой клетки является ее потентность, определяемая степенью дифференцировки и пролиферации. Рассмотрим, что означают данные термины.

Потентность

Потентность – это строго ограниченная способность стволовой клетки превращаться в определенные виды клеток различных органов. Чем большее количество видов клеток может образоваться из стволовой, тем выше ее потентность. Например, из фибробласта (стволовая клетка соединительной ткани) могут образовываться сосуды, жировые клетки, клетки кожи, хрящей, волос и ногтей, а из мезенхимальной стволовой клетки способны сформироваться кардиомиоциты, мышечные волокна и т.д. То есть, каждая стволовая клетка, на самом деле, имеет возможность превращаться только в ограниченный спектр клеток, которые обладают некоторыми общими свойствами и функциями. Например, мезенхимальная стволовая клетка не сможет превратиться в клетку кожи или волос.

В связи с такими ограничениями потентности выделены следующие виды стволовых клеток:

  • Тотипотентные – способны превращаться в клетки всех без исключения органов и тканей;
  • Полипотентные (мультипотентные) – способны превращаться в клетки нескольких видов органов или тканей, имеющих общее эмбриональное происхождение;
  • Монопотентные – способны превращаться только в разновидности клеток какого-либо одного органа.

Тотипотентные или эмбриональные стволовые клетки

Тотипотентностью обладают только стволовые клетки эмбриона человека вплоть до 8-ого деления. То есть, зигота (оплодотворенная яйцеклетка) и формирующийся из нее эмбрион вплоть до того момента, пока он не будет состоять из 256 клеток. Все клетки эмбриона, пока он достигнет размера 256 клеток, и зигота, по сути, являются стволовыми. В обычных условиях получить эмбриональные клетки, обладающие тотипотентностью, очень сложно, поскольку зигота начинает делиться еще в маточной трубе , а после трансплантации в матку она уже больше 256 клеток. То есть, когда женщина узнает о беременности , зародыш уже больше 256 клеток, и, следовательно, они не обладают тотипотентностью.

В настоящее время тотипотентные стволовые клетки получают только в лабораторных условиях, производя оплодотворение яйцеклетки сперматозоидом и выращивая эмбрион до нужного размера. Эмбриональные тотипотентные клетки используются в основном для экспериментов на животных и для выращивания искусственных органов.

Полипотентные стволовые клетки

Полипотентностью обладают стволовые клетки человеческого эмбриона, начиная с 8 деления и до 22 недели беременности. Каждая полипотентная стволовая клетка может превратиться только в несколько видов тканей или органов. Это связано с тем, что на стадии 256 клеток в человеческом эмбрионе начинают выделяться первичные органы и ткани. Именно эти первичные структуры в последующем дадут начало всем без исключения органам и тканям организма человека. Так, у эмбриона появляются мезенхимальные, нервные, кровяные и соединительно-тканные полипотентные стволовые клетки.

Мезенхимальные стволовые клетки

Из мезенхимальных стволовых клеток формируются внутренние органы, такие, как печень, селезенка, почки, сердце, легкие , желчный пузырь, поджелудочная железа , желудок и другие, а также скелетные мышцы. Это означает, что из одной и той же мезенхимальной стволовой клетки могут сформироваться и кардиомиоциты, и гепатоциты, и клетки желудка и т.д.

Нервные стволовые клетки

Из них, соответственно формируются все структуры нервной системы. Из полипотентной стволовой клетки крови образуются все без исключения кровяные форменные элементы, такие, как моноциты , лейкоциты , лимфоциты, тромбоциты и эритроциты . А из соединительно-тканной стволовой клетки формируются все сосуды, хрящи, кости, кожа, подкожная жировая клетчатка, связки и суставы.

Гемопоэтические стволовые клетки

Из них образуются абсолютно все клетки крови. Причем поскольку клетки крови живут довольно мало – от 90 до 120 дней, то они постоянно обновляются и заменяются в течение всей жизни человека. Замена умерших кровяных элементов происходит за счет постоянного формирования новых из гемопоэтических стволовых клеток, находящихся в костном мозгу . Такие гемопоэтические стволовые клетки сохраняются в течение всей жизни человека, а при нарушении их нормального развития у человека появляются заболевания крови, такие, как лейкоз , анемия , лимфомы и т.д.

В настоящее время полипотентные стволовые клетки используются в практической медицине довольно часто, как с целью лечения тяжелых заболевания (например, сахарного диабета , рассеянного склероза , болезни Альцгеймера и т.д.), так и омоложения. Получают полипотентные стволовые клетки из органов абортированных эмбрионов не старше 22 недели гестации. При этом стволовые клетки разделяют в зависимости от того органа, из которого они получены, например, печеночные, мозговые, кровяные и др. Наиболее часто используются клетки фетальной (эмбриональной) печени, поскольку они обладают наиболее универсальной потентностью, необходимой для лечения заболеваний различных органов, например, циррозов печени , инфаркта миокарда и т.д. Мультипотентные стволовые клетки, полученные из органов эмбрионов, также часто называют фетальными. Это название образовано от слова "фетус", которое в переводи с латинского означает плод, эмбрион.

Монопотентные стволовые клетки

После 22 недели гестации все стволовые клетки плода становятся монопотентными и закрепляются за органами и тканями. Монопотентность означает, что клетка может превратиться только в специализированные клетки того органа, в котором она находится. Например, стволовая клетка печени может превратиться только в клетки печеночных протоков или в клетки, образующие желчь, обезвреживающие токсины и т.д. Но весь ее спектр возможных превращений ограничивается только разновидностями клеток печени. Такая монопотентная клетка печени уже не сможет превратиться в клетку селезенки, сердца или любого другого органа в отличие от полипотентной. А закрепленность клеток означает, что они находятся только в этом органе и уже никогда не смогут перейти в другой.

Ребенок рождается уже именно с такими монопотентными стволовыми клетками, которые имеются в каждом органе и ткани без исключения, составляя своеобразный резерв. Из этого резерва в течение жизни образуются новые клетки каждого органа и ткани взамен поврежденных и умерших. В течение всей жизни такие стволовые клетки постепенно расходуются, но даже к моменту смерти человека от старости они еще имеются во всех органах и тканях.

Это означает, что теоретически из органов и тканей ребенка или взрослого человека можно получить только монопотентные стволовые клетки. Такие клетки обычно называют по органу, из которого они были получены, например, нервные, печеночные, желудочные, жировые, костные и т.д. Однако в костном мозгу даже взрослого человека имеется два вида полипотентных стволовых клеток – кровяная и мезенхимальная, которые в настоящее время достаточно просто получить рутинными лабораторными методиками. Для лечения различных заболеваний и омоложения чаще всего используются именно эти кровяные и мезенхимальные полипотентные стволовые клетки, полученные из костного мозга.

Пролиферация и дифференцировка стволовых клеток

Помимо перечисленного свойства потентности, каждая стволовая клетка характеризуется степенью дифференцировки и способностью к пролиферации. Рассмотрим, что означают термины пролиферация и дифференцировка.

Пролиферацией называется способность клетки делиться, то есть, размножаться. Дело в том, что каждая стволовая клетка в процессе превращения в специализированные клеточные структуры каких-либо органов и тканей проходит не только процесс созревания, но и несколько раз делится. Причем деление происходит на каждом очередном этапе созревания. То есть, из одной стволовой клетки получается от нескольких штук до нескольких сотен готовых зрелых клеток какого-либо органа или ткани.

Дифференциация – это степень узкой специализированности клетки, то есть, наличие у нее строго определенной функции, для выполнения которой они созданы. Например, узкоспециализированные клетки сердечной мышцы (кардиомиоциты) созданы только для выполнения сокращений, при помощи которых производится выталкивание крови и обеспечение ее циркуляции по организму. Соответственно, клетки, имеющие свои специализированные функции, называются высокодифференцированными. А относительно универсальные клетки, не имеющие специфических функций, являются низкодифференцированными. В норме в организме человека все клетки органов и тканей являются высокодифференцированными, а к низкодифференцированным относят только монопотентные стволовые клетки. Данные клетки не имеют специфических функций, и потому являются низкодифференцированными.

Процесс превращения стволовой клетки в специализированную, обладающую четкими и определенными функциями, называется дифференцировкой, в ходе которой она превращается из низкодифференцированной в высокодифференцированную. В процессе дифференцировки стволовая клетка проходит многочисленные этапы, на каждом из которых она делится. Соответственно, чем ниже дифференциация стволовой клетки, тем большее количество этапов ей придется пройти в процессе дифференцировки, и тем большее количество раз она будет делиться.

Исходя из этого можно сформулировать следующее простое правило: чем выше потентность клетки, то есть, чем ниже степень дифференцировки, тем сильнее ее способность к пролиферации. Значит, самые низкодифференцированные тотипотентные стволовые клетки обладают наибольшей способностью к пролиферации. И поэтому из одной тотипотентной стволовой клетки образуется несколько тысяч специализированные и высокодифференцированных клеток различных органов и тканей. А самые высокодифференцированные монопотентные стволовые клетки обладают минимальной способностью к пролиферации. Поэтому из одной монопотентой клетки образуется всего несколько высокодифференцированных клеток какого-либо органа или ткани.

Типы стволовых клеток различных органов

В настоящее время у взрослого человека или ребенка стволовые клетки получают из пуповинной крови или костного мозга. Также стволовые клетки для клинических и исследовательских нужд получают из абортивного материала плодов не более 23 недель гестации. Рассмотрим, какие типы стволовых клеток получают из указанных потенциальных источников.

Стволовые клетки мозга

Данный вид клеток получают из мозга абортированных плодов на сроках 18 – 22 недели беременности. Получить мозговые стволовые клетки у менее зрелых эмбрионов технически практически невозможно ввиду их очень маленького размера.

Стволовые клетки мозга относят к нервным полипотентным, то есть, из них могут сформироваться и образоваться любые клеточные структуры нервной системы любого органа или ткани. Например, из стволовых клеток мозга могут образоваться нейроны извилин, структуры спинного мозга, нервные волокна, чувствительные и двигательные рецепторы, проводящая система сердца и т.д. В общем любая нервная клетка в любой части тела человека может сформироваться из мозговой полипотентной стволовой клетки.

Данный вид клеток обычно используют для лечения нейродегенеративных заболеваний и травматических повреждений нервов, таких, как например инсульты, рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера, размозжение тканей, парезы , параличи , ДЦП и т.д.

Стволовые клетки печени

Стволовые клетки печени получают из соответствующего органа плодов на сроках 18 – 22 недели беременности. Данный вид стволовых клеток также называется фетальным. Получить печеночные стволовые клетки у менее зрелых эмбрионов технически практически невозможно ввиду их очень маленького размера и отсутствия у них сформировавшейся печени.

Из печени плодов получают два вида полипотентных стволовых клеток – гемопоэтические и мезенхимальные. На первом этапе получают смесь обоих видов полипотентных стволовых клеток, а затем при необходимости их разделяют. Наибольшей ценностью обладают именно мезенхимальные фетальные клетки, поскольку из них можно вырастить полноценные и функционально активные клетки различных внутренних органов, таких, как легкие, сердце, печень, селезенка, почки, матка, мочевой пузырь , желудок и т.д. В настоящее время в пробирках успешно выращивают клетки практически всех органов, добавляя в питательную среду специальные вещества, заставляющие их дифференцироваться в заданном направлении. Например, для выращивания кардиомиоцита (клетка сердца) в питательную среду добавляют 5-азацитидин, а для получения всех остальных специализированных видов клеток органов – необходимы другие химические вещества. Причем для образования клетки каждого конкретного органа необходимо добавлять в питательные среды строго определенное соединение.

Фетальные печеночные стволовые клетки используются для лечения различных тяжелых, хронических заболеваний внутренних органов, таких, как циррозы, инфаркты, недержание мочи , туберкулез легких, сахарный диабет и т.д.

Стволовые клетки из пуповинной крови

Как понятно из названия, стволовые клетки данного вида получают из пуповинной крови новорожденного младенца . В этом случае также, как и из фетальной печени, получают два вида полипотентных стволовых клеток – гемопоэтические и мезенхимальные. Причем большая часть стволовых клеток, выделенных из пуповинной крови, является гемопоэтическими.

Гемопоэтические клетки могут превращаться в любые клеточные кровяные элементы (тромбоциты, лейкоциты, эритроциты, моноциты и лимфоциты) и способствовать росту сосудов. Небольшой процент гемопоэтических стволовых клеток может превращаться в клетки кровеносных и лимфатических сосудов.

В настоящее время стволовые клетки пуповинной крови чаще всего используются для омоложения или лечения различных тяжелых, хронических заболеваний. Кроме того, многие женщины принимают решение о сборе пуповинной крови и выделении стволовых клеток для дальнейшего хранения в криобанке, чтобы можно было воспользоваться готовым материалом при необходимости.

Наиболее часто применяемая классификация стволовых клеток

В зависимости от потентности выделяют следующие разновидности стволовых клеток:
  • Эмбриональные стволовые клетки (обладают тотипотентностью и получаются из искусственно оплодотворенных яйцеклеток, выращенных в пробирках до необходимого срока);
  • Фетальные стволовые клетки (обладают мультипотентностью и получаются из абортивного материала);
  • Взрослые стволовые клетки (обладают мультипотентностью и получаются из пуповинной крови или костного мозга взрослого человека или ребенка).
Полипотентные стволовые клетки в зависимости от вида их дифференцировки подразделяются на следующие разновидности:
  • Гемопоэтические стволовые клетки (являются предшественниками абсолютно всех клеток крови сосудов);
  • Мезенхимальные стволовые клетки (являются предшественниками всех клеток внутренних органов и скелетных мышц);
  • Соединительно-тканные стволовые клетки (являются предшественниками клеток кожи, костей, жира, хрящей, связок, суставов и сосудов);
  • Нейрогенные стволовые клетки (являются предшественниками абсолютно всех клеток, относящихся к нервной системе).

Получение стволовых клеток

Источниками для получения стволовых клеток являются следующие биологические субстраты:
  • Пуповинная кровь новорожденного младенца;
  • Костный мозг ребенка или взрослого человека;
  • Периферическая кровь (из вены) после специальной стимуляции;
  • Абортивный материал, полученный от женщин на 2 – 12 неделях беременности;
  • Плоды на сроках 18 – 22 недели беременности, которые умерли в результате преждевременных родов , позднего выкидыша или аборта по социальным показаниям;
  • Ткани недавно умерших здоровых людей (например, смерть наступила в результате травмы и т.д.);
  • Жировая ткань взрослого человека или ребенка;
  • Оплодотворение в пробирке яйцеклетки сперматозоидом с образованием зиготы.
Наиболее часто стволовые клетки получают из пуповинной крови, костного мозга или абортивного материала. Остальные способы получения стволовых клеток используются исключительно для исследовательских целей.

Получение стволовых клеток из пуповинной и периферической крови, а также костного мозга производится при помощи одних и тех же методов. Для их получения, во-первых, забирают костный мозг (от 20 до 200 мл) в ходе пункции подвздошной кости у взрослых людей или грудины у детей. Периферическую кровь забирают из вены так же, как для переливания . А пуповинную кровь просто собирают в стерильную пробирку прямо в родильном доме, подставив ее под перерезанную пуповину младенца.

Затем кровь или костный мозг транспортируют в лабораторию, где из них выделяют стволовые клетки одним из двух возможных методов. Чаще всего применяют разделение в градиенте плотности фиколл-урографина. Для этого в пробирку наливают слой фиколла, затем поверх него аккуратно наливают урографин так, чтобы растворы не перемешались. И наконец на поверхность урографина также аккуратно наслаивают кровь или костный мозг, стараясь, чтобы он минимально смешался с двумя предыдущими растворами. Затем пробирку откручивают в центрифуге на высокой скорости не менее 8 000 оборотов в минуту, в результате чего на границе раздела фаз фиколла и урографина уплотняется и концентрируется тонкое кольцо стволовых клеток. Это кольцо аккуратно собирают пипеткой в другую стерильную пробирку. Затем в нее наливают питательную среду и еще несколько раз откручивают на центрифуге, чтобы удалить все случайно попавшие в кольцо нестволовые клетки. Готовые стволовые клетки или помещают в питательную среду для дальнейшего выращивания (культивирования), или замораживают в жидком азоте для длительного хранения, или разбалтывают в физиологическом растворе и вводят в виде инъекции человеку, проходящему курс клеточной терапии.

Вторым, менее распространенным методом получения стволовых клеток является обработка крови или костного мозга лизирующим буфером. Лизирующий буфер – это специальный раствор со строго подобранными концентрациями солей, которые вызывают гибель всех клеток, кроме стволовых. Для выделения стволовых клеток кровь или костный мозг смешивают с лизирующим буфером и оставляют на 15 – 30 минут, после чего откручивают на центрифуге. Собравшийся на дне пробирки шарик и есть стволовые клетки. Всю жидкость, находящуюся над шариком клеток сливают, в пробирку заливают питательную среду и еще несколько раз откручивают на центрифуге, чтобы удалить все случайно попавшие ненужные клетки. Готовые стволовые клетки используют так же, как и полученные методом разделения на градиенте плотности фиколл-урографина.

Получение стволовых клеток из абортивного материала, тканей умерших людей или жира живых взрослых или детей является более трудоемкой процедурой, которую используют только хорошо оснащенные лаборатории или научные учреждения. В ходе выделения клеток производится обработка материала специальными ферментами, которые разрушают целостность тканей и превращают их в одну аморфную массу. Данную массу по частям обрабатывают лизирующим буфером и далее выделяют стволовые клетки так же, как и из крови или костного мозга.

Стволовые клетки из плодов 18 – 22 недель беременности получить так же просто, как и из крови или костного мозга. Дело в том, что стволовые клетки в данном случае получают не из всего плода, а только из печени, селезенки или головного мозга. Ткани органов измельчают механически, после чего разбалтывают в физиологическом растворе или питательной среде. Затем получают стволовые клетки либо при помощи лизирующего буфера, либо разделением на градиенте плотности фиколл-урографина.

Получение стволовых клеток методом оплодотворения яйцеклетки используется только в научных учреждениях. Этот метод доступен только высококвалифицированным ученым - клеточным биологам. Обычно таким образом получают эмбриональные стволовые клетки для экспериментальных исследований. А яйцеклетки и сперматозоиды забирают у здоровых женщин и мужчин, согласившихся стать донорами. За такое донорство научные учреждения выплачивают весьма ощутимое вознаграждение – не менее 3 – 4 тысяч долларов за порцию спермы мужчины и несколько яйцеклеток женщины, которые удастся забрать в ходе одной пункции яичника .

Выращивание стволовых клеток

Термин "выращивание" стволовых клеток не совсем правильный, однако его вполне можно использовать для обиходной речи. Ученые обычно для описания данной процедуры используют термин "культивирование стволовых клеток". Культивация или выращивание стволовых клеток – это процесс поддержания их жизни в специальных растворах, содержащих питательные вещества (питательных средах).

В ходе культивации количество стволовых клеток постепенно увеличивается, вследствие чего каждые 3 недели содержимое одного флакона с питательной средой разделяют на 2 или 3. Такая культивация стволовых клеток может производиться сколько угодно долго, если имеется необходимое оборудование и питательные среды. Однако на практике стволовые клетки не удается размножить до большого количества, поскольку очень часто происходит их заражение различными патогенными микробами, попавшими случайно в воздух лабораторного помещения. Такие зараженные стволовые клетки использовать и культивировать уже нельзя, и их просто выбрасывают.

Следует помнить, что выращивание стволовых клеток – это всего лишь увеличение их количества. Невозможно вырастить стволовые клетки из нестволовых.

Обычно стволовые клетки культивируют до тех пор, пока их число не окажется достаточным для выполнения лечебной инъекции или постановки эксперимента. Также клетки могут культивировать перед замораживанием в жидком азоте, чтобы запас был побольше.

Отдельно стоит сказать о специальной культивации стволовых клеток, когда в питательную среду добавляют различные соединения, которые способствуют дифференцировке в определенный тип клеток, например, кардиомиоциты или гепатоциты и т.д.

Использование стволовых клеток

В настоящее время использование стволовых клеток делится на три сферы – это экспериментальные исследования, лечение различных заболеваний и омоложение. Причем сфера экспериментальных исследований занимает не менее 90% общего пула использования стволовых клеток. В ходе экспериментов врачи-биологи изучают возможность перепрограммирования и расширения потентности клеток, способы их превращения в различные специализированные клетки различных органов, методы выращивания целых органов и т.д. В экспериментальной сфере использования стволовых клеток прогресс идет буквально семимильными шагами, поскольку каждый день ученые сообщают о новых достижениях. Так, уже были выращены нормально функционирующие сердце и печень из стволовых клеток. Правда эти органы не пробовали кому-либо пересаживать, но это произойдет уже в обозримом будущем. Соответственно, решится проблема донорских органов для людей, которым требуется трансплантация. Уже реальностью является использование клапанов сосудов и сердца, выращенных из стволовых клеток, для протезирования .

Использование стволовых клеток для лечения различных заболеваний проводится в рамках ограниченных клинических испытаний, когда больному предлагается данный вариант и объясняется, какие положительные моменты и риски это может повлечь. Обычно стволовые клетки применяют только для терапии тяжелых, хронических и неизлечимых другими методами заболеваний, когда шансов на выживание и хоть небольшое улучшение состояния практически нет. Благодаря таким клиническим испытаниям врачи получают возможность видеть, каковы эффекты стволовых клеток, и какие побочные действия может вызывать их использование. На основании результатов наблюдений разрабатываются наиболее безопасные и эффективные клинические протоколы, в которых прописываются рекомендованные дозировки стволовых клеток (общее вводимое количество в штуках), места и способы введения, а также оптимальные сроки терапии и ожидаемые эффекты.

С целью омоложения стволовые клетки могут вводить в подкожную клетчатку или в структуры кожи, а также внутривенно. Такое применения стволовых клеток позволяет уменьшить видимые признаки возрастных изменений на некоторый промежуток времени. Для поддержания длительного эффекта стволовые клетки придется вводить периодически через индивидуально подобранные интервалы. В принципе, данная манипуляция при правильном выполнении является безопасной.

Лечение стволовыми клетками различных заболеваний – общие принципы и эффекты

Для лечения различных заболеваний чаще всего используют стволовые клетки, полученные из костного мозга самого пациента. Для этого сначала в ходе пункции забирают необходимый объем костного мозга (от 20 мл до 200 мл), из которого в специализированной лаборатории выделяют стволовые клетки. Если их недостаточно, то производится культивирование до тех пор, пока клетки не размножатся до необходимого количества. Также поступают, если планируют сделать несколько введений стволовых клеток на курс лечения. Культивация позволяет получить необходимое количество стволовых клеток без повторных пункций костного мозга.

Кроме того, достаточно часто применяют стволовые клетки из костного мозга донора, в качестве которого обычно выступают кровные родственники. В таком случае для устранения риска отторжения перед введением клеток их культивируют на питательной среде минимум 21 день. Такая длительная культивация приводит к потере индивидуальных антигенов, и клетки уже не будут вызывать реакции отторжения.

Реже используют стволовые клетки печени, поскольку их необходимо покупать. Чаще всего данный вид клеток используют для омоложения.

Готовые стволовые клетки вводят в организм различными способами. Причем введение стволовых клеток называется трансплантацией, которая производится различными путями в зависимости от заболевания. Так, при болезни Альцгеймера стволовые клетки трансплантируют в спинномозговую жидкость при помощи люмбальной пункции. При заболеваниях внутренних органов клетки трансплантируются следующими основными способами:

  • Внутривенное введение стволовых клеток, разболтанных в стерильном физиологическом растворе;
  • Введение стволовых клеток в сосуды пораженного органа при помощи специального оборудования;
  • Введение стволовых клеток непосредственно в пораженный орган в ходе оперативного вмешательства;
  • Введение стволовых клеток внутримышечно в непосредственной близости от пораженного органа;
  • Введение стволовых клеток подкожно или внутрикожно.
Чаще всего клетки вводят внутривенно. Но в каждом конкретном случае метод выбирается врачом, исходя из общего состояния человека и желаемого эффекта.

Клеточная терапия (лечение стволовыми клетками) во всех случаях приводит к улучшению состояния человека, частично восстанавливает утраченные функции, повышает качество жизни, уменьшает скорость прогрессирования заболевания и развития осложнений.

Однако следует помнить, что лечение стволовыми клетками не является панацеей, оно не сможет исцелить полностью или отменить традиционной терапии. На современном этапе развития науки стволовые клетки могут использоваться только в качестве дополнения к традиционной терапии. Когда-нибудь, возможно, будут разработаны способы лечения только при помощи стволовых клеток, но сегодня это мечта. Поэтому принимая решение об использовании стволовых клеток, помните, что отменять всю остальную терапию тяжелого хронического заболевания нельзя. Трансплантация клеток только улучшит состояние и повысит эффективность традиционной терапии.

Лечение стволовыми клетками: основные проблемы - видео

Стволовые клетки: история открытия, виды, роль в организме, получение и особенности лечения - видео

Банк стволовых клеток

Банк стволовых клеток – это специализированная лаборатория, оснащенная оборудованием для их получения и длительного хранения в жидком азоте. В банках стволовых клеток можно хранить пуповинную кровь или собственные клетки, оставшиеся от какой-либо манипуляции. Каждый банк стволовых клеток имеет свои расценки на услуги, которые могут существенно отличаться. Однако рекомендуется выбирать такую организацию не по прайс-листу, а по профессионализму сотрудников и степени оснащенности оборудованием.

В настоящее время практически во всех крупных городах России имеются подобные банки, которые предлагают свои услуги физическим и юридическим лицам.

Перед применением необходимо проконсультироваться со специалистом.